Agouti基因除了對黑色素的形成具有調(diào)控作用外，其與機(jī)體的能量代謝調(diào)控也密切相關(guān)。山羊是重要的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，研究和探討不同毛色山羊不同內(nèi)臟器官Agouti基因mRNA及其編碼蛋白的差異表達(dá)特征，可以為進(jìn)行轉(zhuǎn)錄調(diào)控等基因上游水平研究和對其表觀遺傳學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)深入探索提供理論基礎(chǔ)，同時(shí)在山羊分子遺傳育種方面也具有重要意義。 本研究利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（RT-qPCR）驗(yàn)證了白色、棕色和黑色三種毛色山羊不同內(nèi)臟器官（心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟）中Agouti基因mRNA表達(dá)水平的差異。試驗(yàn)采用2-△△Ct方法分別從不同毛色山羊相同內(nèi)臟器官、相同毛色山羊不同內(nèi)臟器官Agouti基因mRNA表達(dá)量和山羊不同內(nèi)臟器官Agouti基因mRNA總相對表達(dá)量三個(gè)水平進(jìn)行了檢測。在以白色山羊?yàn)閷φ盏牟煌窖蛳嗤瑑?nèi)臟器官角度進(jìn)行比較時(shí)，白色山羊五個(gè)內(nèi)臟Agouti基因mRNA表達(dá)量均最高，其次是棕色山羊，黑色山羊表達(dá)量最低，且白色山羊和黑色山羊表達(dá)量差異極顯著（P<0.01），這一特征突出表現(xiàn)在肝臟。在以肺臟為對照的相同毛色山羊不同內(nèi)臟器官角度作對比時(shí)，白色和棕色山羊的五個(gè)內(nèi)臟中，肝臟...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 AGOUTI 的涵義
    1.2 AGOUTI 基因研究現(xiàn)狀
        1.2.1 AGOUTI 信號蛋白與 AGOUTI 基因一因多效
        1.2.2 AGOUTI 基因作用機(jī)理
        1.2.3 AGOUTI 基因的研究現(xiàn)狀
        1.2.4 本課題組對山羊 AGOUTI 基因研究進(jìn)展
    1.3 本研究的目的、意義及主要內(nèi)容
        1.3.1 研究的目的和意義
        1.3.2 研究的主要內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 主要試驗(yàn)材料及設(shè)備
        2.1.1 樣本采集
        2.1.2 主要試劑和藥品
            2.1.2.1 熒光定量 PCR (RT‐QRCR)所用藥品及試劑
            2.1.2.2 WESTERN BLOTTING 所用藥品及試劑
        2.1.3 主要試驗(yàn)儀器與設(shè)備
            2.1.3.1 RT‐qRCR所使用的主要試驗(yàn)儀器與設(shè)備
            2.1.3.2 Western blotting所用主要試驗(yàn)儀器與設(shè)備
        2.1.4 主要試劑的配制
            2.1.4.1 RT‐qRCR主要試劑的配制
            2.1.4.2 Western blotting主要試劑的配制
        2.1.5 結(jié)果分析軟件
            2.1.5.1 RT‐qPCR試驗(yàn)主要分析軟件
            2.1.5.2 Western blotting 試驗(yàn)主要分析軟件
    2.2 試驗(yàn)方法和步驟
        2.2.1 山羊內(nèi)臟器官總 RNA 提取、純化、檢測和反轉(zhuǎn)錄
        2.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（RT-QPCR）試驗(yàn)
        2.2.3 山羊內(nèi)臟器官總蛋白的提取與檢測
        2.2.4 蛋白免疫印跡（WESTERN BLOTTING）試驗(yàn)
3 結(jié)果與分析
    3.1 不同毛色山羊不同內(nèi)臟器官 AGOUTI 基因 MRNA 差異表達(dá)研究
        3.1.1 不同毛色山羊內(nèi)臟器官總 RNA 提取
        3.1.2 反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物保真性檢測結(jié)果及最佳 PCR 反應(yīng)條件建立
        3.1.3 切膠回收純化 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物和重組子構(gòu)建結(jié)果
        3.1.4 標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒的提取
        3.1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立結(jié)果
        3.1.6 擴(kuò)增曲線建立結(jié)果
        3.1.7 熔解曲線的建立及樣本 RT-QPCR 檢測結(jié)果
        3.1.8 樣本 MRNA 相對表達(dá)量比較分析
    3.2 不同毛色山羊不同內(nèi)臟器官 AGOUTI 信號蛋白（ASIP）差異表達(dá)研究
        3.2.1 山羊內(nèi)臟器官總蛋白的提取
        3.2.2 蛋白濃度的測定
        3.2.3 免疫反應(yīng)抗體濃度的優(yōu)化
        3.2.4 印跡膜化學(xué)發(fā)光檢測結(jié)果
4 討論
    4.1 山羊臟器組織塊的處理
    4.2 總 RNA 的提取
    4.3 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)
    4.4 不同毛色山羊不同內(nèi)臟器官 AGOUTI 基因 MRNA 差異表達(dá)
    4.5 總蛋白的提取與含量測定
    4.6 WESTERN BLOTTING 試驗(yàn)與不同毛色山羊不同內(nèi)臟器官 ASIP 蛋白差異表達(dá)
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的論文
作者簡介
致謝



本文編號：3743135