發(fā)布時(shí)間：2023-02-10 20:25

　　目的:本試驗(yàn)以研究綿羊支原體肺炎的抗病分子機(jī)制為目的,通過生物信息學(xué)的方法篩選,以期得到與MBL抗綿羊支原體肺炎相關(guān)的差異microRNA(miRNA)及基因,確定靶基因的生物學(xué)功能,并在細(xì)胞水平上進(jìn)行驗(yàn)證,深入研究其在綿羊支原體肺炎中的調(diào)控機(jī)制,為豐富抗支原體肺炎的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法:(1)miRNA在MBL抗綿羊支原體肺炎中可能起到關(guān)鍵作用,利用生物信息學(xué)方法聯(lián)合分析本課題組前期研究建立的高通量測(cè)序數(shù)據(jù)庫(kù)和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)庫(kù),篩選差異表達(dá)的miRNA及基因,TargetScan等軟件預(yù)測(cè)差異表達(dá)miRNA的靶基因。(2)分別構(gòu)建含有靶基因TRAF6 3’-UTR區(qū)的野生型和突變型的報(bào)告基因,利用Dual-Luciferase?Reporter Assay System驗(yàn)證miR-509-5p對(duì)靶基因TRAF6的靶向調(diào)控作用。(3)呼吸道黏膜上皮是綿羊支原體肺炎的關(guān)鍵宿主,通過原代培養(yǎng)綿羊呼吸道黏膜上皮細(xì)胞,將miR-509-5p mimic、miR-509-5p mimic NC、miR-509-5p inhibitor以及miR-509-5p inhibitor NC轉(zhuǎn)染至該細(xì)...

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
課題來源
摘要
Abstract
主要縮寫詞
第一章 緒論
    1 論文研究的目的與意義
    2 國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展
        2.1 綿羊支原體肺炎
        2.2 甘露聚糖結(jié)合凝集素
        2.3 微小RNA
        2.4 免疫調(diào)控通路
    3 研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線
    4 技術(shù)路線
第二章 試驗(yàn)研究
    試驗(yàn)一mi RNA-mRNA聯(lián)合分析篩選MBL抗綿羊支原體肺炎的差異基因
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 材料
            2.2 試驗(yàn)方法
        3 試驗(yàn)結(jié)果
            3.1 差異表達(dá)miRNA分析
            3.2 qRT-PCR驗(yàn)證
            3.3 靶基因預(yù)測(cè)
            3.4 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)庫(kù)篩選分析差異表達(dá)基因
            3.5 差異miRNA靶基因富集分析
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗(yàn)二雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)鑒定oar-miR-509-5p對(duì) TRAF6 基因的靶向調(diào)控
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 材料
            2.2 試驗(yàn)方法
        3 試驗(yàn)結(jié)果
            3.1 oar-miR-509-5p的靶基因預(yù)測(cè)
            3.2 psiCHECKTM-2 野生型和突變型載體構(gòu)建與鑒定
            3.3 293T細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)染
            3.4 oar-miR-509-5p對(duì) TRAF6 表達(dá)的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗(yàn)三miR-509-5p對(duì)呼吸道黏膜上皮細(xì)胞及NF-κB通路中相關(guān)基因影響的研究
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 材料
            2.2 試驗(yàn)方法
        3 試驗(yàn)結(jié)果
            3.1 綿羊呼吸道黏膜上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            3.2 呼吸道黏膜上皮細(xì)胞的免疫組化染色
            3.3 miR-509-5p對(duì) NF-κB通路中相關(guān)基因的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗(yàn)四miR-509-5p在 MO感染呼吸道黏膜上皮細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路中的作用
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 材料
            2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3 試驗(yàn)結(jié)果
            3.1 測(cè)序結(jié)果SNP分析
            3.2 PI染色法檢測(cè)細(xì)胞死亡率
            3.3 NF-κB通路中IL-12、TNF-α、IL-6、IL-1β細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
            3.4 細(xì)胞培養(yǎng)液上清中IL-12、TNF-α、IL-6、IL-1βELISA檢測(cè)結(jié)果
            3.5 NF-κB通路中TRAF6 等基因?qū)崟r(shí)熒光定量結(jié)果
        4 討論
        5 小結(jié)
第三章 結(jié)論
第四章 論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
附件



本文編號(hào)：3739855