禽肝炎-心包積液綜合征(Hydropericardium-hepatitis syndrome,HHS)是由禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)引起的一類急性高致病性傳染病。自2015年我國(guó)爆發(fā)以來,迅速傳播蔓延至全國(guó)。目前,關(guān)于FAdV-4的研究還主要集中在病毒基因組分析、病原檢測(cè)等方面,有關(guān)FAdV-4在宿主細(xì)胞上的增殖特性及入侵途徑還尚不明確。本研究選取雞肝癌細(xì)胞(Leghorn male hepatocellular cells,LMH)作為研究對(duì)象,進(jìn)行了FAdV-4在LMH細(xì)胞上增殖規(guī)律及入侵途徑的研究,從而對(duì)FAdV-4入侵宿主細(xì)胞的機(jī)制研究提供了理論基礎(chǔ)。結(jié)果如下:(1)不同感染復(fù)數(shù)的FAdV-4接種LMH細(xì)胞后的增殖規(guī)律有較大差異。用FAdV-4感染LMH細(xì)胞后,通過Real-time PCR及Western blot檢測(cè)FAdV-4病毒拷貝數(shù)及Hexon蛋白表達(dá)量。研究發(fā)現(xiàn),以MOI=1接種LMH細(xì)胞后,FAdV-4病毒拷貝數(shù)及Hexon蛋白表達(dá)量在感染后72 h到達(dá)最高。以MOI=10接種LMH細(xì)胞后,Hexon蛋...

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號(hào)對(duì)照表
文獻(xiàn)綜述
    第一章 禽腺病毒血清4型及細(xì)胞入侵途徑的研究進(jìn)展
        1.1 禽腺病毒血清4型研究進(jìn)展
            1.1.1 病原學(xué)
            1.1.2 流行病學(xué)
            1.1.3 臨床癥狀與病理變化
            1.1.4 診斷方法
            1.1.5 防治措施
        1.2 病毒入侵細(xì)胞途徑的研究進(jìn)展
            1.2.1 膜融合作用入侵細(xì)胞
            1.2.2 內(nèi)吞作用入侵細(xì)胞
            1.2.3 巨胞飲作用
            1.2.4 其他入侵細(xì)胞途徑
        1.3 本研究的目的與意義
試驗(yàn)研究
    第二章 FAdV-4在LMH細(xì)胞上增殖規(guī)律及入侵動(dòng)力學(xué)研究
        2.1 材料
            2.1.1 細(xì)胞與病毒
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
            2.1.4 主要溶液配制
        2.2 方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 FAdV-4 擴(kuò)增及病毒滴度測(cè)定
            2.2.3 FAdV-4 入侵動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)
            2.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)
            2.2.5 激光共聚焦顯微鏡觀察
            2.2.6 蛋白免疫印跡檢測(cè)(Western blot)
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 FAdV-4 感染LMH細(xì)胞后CPE觀察
            2.3.2 FAdV-4 感染LMH細(xì)胞的TCID50 測(cè)定
            2.3.3 FAdV-4在LMH細(xì)胞上的增殖規(guī)律研究
            2.3.4 FAdV-4 感染LMH細(xì)胞的入侵動(dòng)力學(xué)研究
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 FAdV-4 入侵LMH細(xì)胞途徑的研究
        3.1 材料
            3.1.1 細(xì)胞與病毒
            3.1.2 主要試劑
            3.1.3 主要儀器
        3.2 方法
            3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            3.2.2 CCK法篩選化學(xué)抑制劑最適濃度
            3.2.3 透射電鏡觀察
            3.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)
            3.2.5 激光共聚焦顯微鏡觀察
            3.2.6 蛋白免疫印跡檢測(cè)(Western blot)
            3.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 化學(xué)抑制劑最適濃度篩選
            3.3.2 透射電鏡發(fā)現(xiàn)FAdV-4 入侵LMH細(xì)胞與內(nèi)吞及巨胞飲途徑相關(guān)
            3.3.3 FAdV-4 入侵LMH細(xì)胞不依賴胞內(nèi)酸性環(huán)境但需要Dynamin參與
            3.3.4 FAdV-4 入侵LMH細(xì)胞依賴于小窩蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑
            3.3.5 FAdV-4 入侵LMH依賴于巨胞飲途徑且需要PI3K的參與
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3736935