前體脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞的過程異常復(fù)雜,該過程對哺乳動物脂肪組織生成和代謝是十分必要的。這一復(fù)雜過程受到很多調(diào)節(jié)因子的調(diào)控。microRNAs(miRNAs)是長度大約為22個核苷酸的非編碼小RNA,通過靶基因的介導(dǎo)參與許多生命過程的調(diào)控,包括脂肪細(xì)胞分化過程。用成脂抑制劑LiCl處理3T3-L1前體脂肪細(xì)胞后誘導(dǎo)分化,發(fā)現(xiàn)miR-214-3p顯著下調(diào),并且miR-214-3p在小鼠、豬和人等多個物種間序列高度保守。因此,本研究以3T3-L1細(xì)胞系作為研究材料,旨在探究miR-214-3p在3T3-L1前體脂肪細(xì)胞分化中的作用與機制。本實驗通過對3T3-L1細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-214-3p模擬物(agomir)或拮抗劑(antagomir),研究了miR-214-3p對3T3-L1前體脂肪細(xì)胞增殖和分化的作用;運用生物信息學(xué)軟件分析和雙熒光素酶報告實驗,預(yù)測并且驗證了miR-214-3p在3T3-L1細(xì)胞分化中的潛在靶基因。獲得的主要研究結(jié)果如下:1.miR-214-3p促進(jìn)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞的增殖在3T3-L1細(xì)胞中過表達(dá)miR-214-3p后,可以明顯上調(diào)細(xì)胞增殖相關(guān)基因C...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 miRNA的產(chǎn)生及作用機制
        1.1.1 miRNA的產(chǎn)生
        1.1.2 miRNA的作用機制
    1.2 脂肪組織的生物學(xué)功能及成脂調(diào)控
        1.2.1 脂肪組織的生物學(xué)功能
        1.2.2 脂肪細(xì)胞的成脂調(diào)控
    1.3 miRNA在脂肪生成中的研究進(jìn)展
        1.3.1 參與成脂激活的miRNAs
        1.3.2 參與成脂抑制的miRNAs
        1.3.3 參與棕色和米色脂肪細(xì)胞調(diào)節(jié)的miRNAs
    1.4 miR-214-3p的研究進(jìn)展
        1.4.1 miR-214-3p的簡介
        1.4.2 miR-214-3p的生物學(xué)功能
第二章 miR-214-3p表達(dá)與脂質(zhì)生成的相關(guān)性研究
    2.1 材料和方法
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.1.3 熒光定量PCR
        2.1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 miR-214-3p的小鼠組織表達(dá)譜和 3T3-L1增殖、分化過程的表達(dá)時序
        2.2.2 肥胖小鼠模型構(gòu)建及miR-214-3p的差異表達(dá)分析
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 miR-214-3p對 3T3-L1前體脂肪細(xì)胞增殖的作用研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 培養(yǎng)基的配制
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.1.4 細(xì)胞的培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        3.1.5 總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        3.1.6 總蛋白的提取及蛋白免疫印跡
        3.1.7 實時熒光定量PCR
        3.1.8 CCK-8 實驗
        3.1.9 Ed U實驗
        3.1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 miR-214-3p促進(jìn) 3T3-L1前體脂肪細(xì)胞的增殖
        3.2.2 miR-214-3p促進(jìn)細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)
        3.2.3 干擾miR-214-3p抑制 3T3-L1前體脂肪細(xì)胞的增殖
        3.2.4 干擾miR-214-3p下調(diào)3T3-L1細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 miR-214-3p對 3T3-L1細(xì)胞分化的作用研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 細(xì)胞的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染處理
        4.1.3 細(xì)胞總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        4.1.4 熒光定量PCR
        4.1.5 細(xì)胞總蛋白的提取及免疫印跡實驗
        4.1.6 Bodipy染色實驗
        4.1.7 油紅O染色實驗
        4.1.8 數(shù)據(jù)分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)成脂分化過程中細(xì)胞形態(tài)的變化
        4.2.2 miR-214-3p促進(jìn) 3T3-L1細(xì)胞的脂質(zhì)沉積
        4.2.3 miR-214-3p促進(jìn)成脂標(biāo)志基因的表達(dá)
        4.2.4 干擾miR-214-3p減少 3T3-L1細(xì)胞的脂質(zhì)沉積
        4.2.5 干擾miR-214-3p抑制成脂基因的表達(dá)
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第五章 miR-214-3p調(diào)控 3T3-L1細(xì)胞成脂分化的靶基因預(yù)測及驗證
    5.1 材料和方法
        5.1.1 試驗材料
        5.1.2 miRNA靶基因預(yù)測
        5.1.3 靶基因Ctnnb1的定量引物設(shè)計
        5.1.4 雙熒光素酶載體的構(gòu)建
        5.1.5 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        5.1.6 細(xì)胞總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        5.1.7 熒光定量PCR
        5.1.8 細(xì)胞總蛋白的提取及免疫印跡實驗
        5.1.9 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 靶基因的預(yù)測
        5.2.2 miR-214-3p靶基因的通路富集分析
        5.2.3 Ctnnb1在 3T3-L1細(xì)胞分化過程中的表達(dá)時序
        5.2.4 miR-214-3p抑制Ctnnb1的表達(dá)
        5.2.5 雙熒光素酶報告系統(tǒng)分析驗證miR-214-3p直接靶定Ctnnb1
    5.3 討論
    5.4 小結(jié)
結(jié)論、創(chuàng)新點及進(jìn)一步研究內(nèi)容
    結(jié)論
    創(chuàng)新點
    進(jìn)一步研究內(nèi)容
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個人簡歷



本文編號：3735594