“金蒲”灌注劑是本實(shí)驗(yàn)室研制的一種治療奶牛乳房炎的純中藥制劑,咖啡酸是該方劑中的一種主要活性成分,本文通過(guò)研究咖啡酸抗脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞(bMEC)的炎性損傷作用及其分子機(jī)制,為該方劑的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。 本研究通過(guò)MTT法檢測(cè)LPS對(duì)bMEC細(xì)胞活力的影響,并篩選了LPS誘導(dǎo)bMEC損傷模型條件；利用掃描、透射電鏡觀察bMEC超微結(jié)構(gòu)變化和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)bMEC的凋亡情況對(duì)損傷模型進(jìn)行了評(píng)價(jià)；通過(guò)深度測(cè)序技術(shù)分析LPS誘導(dǎo)的bMEC基因表達(dá)譜變化,篩選差異基因并對(duì)其進(jìn)行多重分析,預(yù)測(cè)了LPS誘導(dǎo)的bMEC損傷分子機(jī)制；利用Western Blot及RT-PCR技術(shù)對(duì)相關(guān)炎癥信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白和炎性因子的表達(dá)進(jìn)行了驗(yàn)證；并探討了咖啡酸抗LPS誘導(dǎo)的bMEC結(jié)構(gòu)損傷的分子機(jī)制。相關(guān)研究結(jié)果如下： 不同濃度的LPS(10、50、100、200μg/mL)作用bMEC不同時(shí)間(3、6、12、18h)后,結(jié)果顯示,LPS能夠顯著地降低bMEC的細(xì)胞活力,這種作用具有明顯的時(shí)間、劑量依賴性。選擇50μg/mL的LPS作用bMEC12h作為損傷模型條件。掃描電鏡觀...

【文章頁(yè)數(shù)】：104 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
英文縮略詞表
插圖清單
附表清單
第一章 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 研究目的和意義
    1.3 研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線
第二章 奶牛乳腺上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞損傷模型的建立
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 咖啡酸抗LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞損傷作用
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
    4.3 試驗(yàn)結(jié)果
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞基因表達(dá)譜變化分析
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
    5.3 試驗(yàn)結(jié)果
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第六章 咖啡酸抗LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞損傷作用的分子機(jī)制
    6.1 引言
    6.2 材料與方法
    6.3 試驗(yàn)結(jié)果
    6.4 討論
    6.5 小結(jié)
結(jié)論和創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3735431