發(fā)布時間：2023-01-29 17:36

　　甲基轉(zhuǎn)移酶樣21（Methyltransferase like 21,METTL21）是甲基轉(zhuǎn)移酶超家族的一類遠親成員,包括METTL21A、METTL21B、METTL21C和METTL21D四個成員。其中METTL21C在動物機體各個組織中均表達,尤其是骨骼肌組織中特異性高表達。研究發(fā)現(xiàn),METTL21C能夠促進小鼠C2C12細胞的成肌分化,抑制肌肉萎縮,但其在家禽骨骼肌中的功能研究相對較少。因此,本論文旨在探究METTL21C影響禽類骨骼肌生長發(fā)育機制,為改善家禽肌肉品質(zhì)、提高生產(chǎn)性能提供參考價值,也為運動科學(xué)、肌肉疾病及代謝穩(wěn)態(tài)等醫(yī)學(xué)問題奠定理論基礎(chǔ)。本研究以略陽烏雞為研究對象,采用酶消化法分離雞原代骨骼肌衛(wèi)星細胞,并以此為細胞模型,探究METTL21C對成肌分化的影響;通過液相色譜質(zhì)譜檢測和免疫共沉淀技術(shù)鑒定METTL21C的互作蛋白,驗證METTL21C與Hsc70結(jié)合在成肌分化過程中的作用,最終系統(tǒng)闡述METTL21C影響家禽骨骼肌生長發(fā)育的分子機理。本研究主要獲得實驗結(jié)果如下:1.分析略陽烏雞腿肌組織轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù),結(jié)合文獻查閱,發(fā)現(xiàn)甲基轉(zhuǎn)移酶METTL21C基因可能影... 

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞
第1章 緒論
    1.1 家禽骨骼肌的生物學(xué)特性
        1.1.1 骨骼肌的組織結(jié)構(gòu)特點
        1.1.2 骨骼肌的生長發(fā)育過程
    1.2 蛋白質(zhì)翻譯后修飾
    1.3 蛋白甲基化修飾調(diào)控肌肉發(fā)育
        1.3.1 蛋白質(zhì)甲基化修飾
        1.3.2 蛋白質(zhì)精氨酸甲基化修飾調(diào)控肌肉發(fā)育
        1.3.3 蛋白質(zhì)賴氨酸甲基化修飾影響肌肉發(fā)育
    1.4 甲基轉(zhuǎn)移酶METTL21C與骨骼肌發(fā)育
    1.5 分子伴侶HSC70維持骨骼肌穩(wěn)態(tài)
    1.6 本研究目的意義
第2章 轉(zhuǎn)錄組測序篩選雞骨骼肌發(fā)育關(guān)鍵基因
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 略陽烏雞腿肌組織轉(zhuǎn)錄組測序
        2.2.2 RNA-seq數(shù)據(jù)質(zhì)控及數(shù)據(jù)庫比對
        2.2.3 差異基因表達分析
        2.2.4 METTL21C基因表達規(guī)律檢測
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 RNA-seq質(zhì)量評估
        2.3.2 差異基因表達分析
        2.3.3 METTL21C表達規(guī)律檢測
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 雞原代骨骼肌衛(wèi)星細胞的分離及鑒定
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 雞原代骨骼肌衛(wèi)星細胞的分離與培養(yǎng)
        3.2.2 雞原代骨骼肌衛(wèi)星細胞的鑒定
        3.2.3 骨骼肌衛(wèi)星細胞的成肌誘導(dǎo)分化
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 骨骼肌衛(wèi)星細胞分離培養(yǎng)
        3.3.2 骨骼肌衛(wèi)星細胞的RT-PCR鑒定
        3.3.3 標志基因Pax7 表達水平檢測
        3.3.4 骨骼肌衛(wèi)星細胞誘導(dǎo)分化及鑒定
    3.4 討論
        3.4.1 原代骨骼肌衛(wèi)星細胞的分離
        3.4.2 骨骼肌衛(wèi)星細胞的鑒定
    3.5 小結(jié)
第4章 METTL21C基因功能驗證
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗動物、質(zhì)粒及菌株
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 METTL21C基因超表達載體構(gòu)建
        4.2.2 METTL21C超表達載體轉(zhuǎn)染雞骨骼肌衛(wèi)星細胞
        4.2.3 Pax7、MyoD等肌肉發(fā)育基因表達檢測
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 METTL21C超表達載體的構(gòu)建
        4.3.2 原代骨骼肌衛(wèi)星細胞轉(zhuǎn)染
        4.3.3 超表達METTL21C對肌肉發(fā)育基因的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第5章 METTL21C與 Hsc70互作探究
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗細胞、質(zhì)粒
        5.1.2 實驗試劑
        5.1.3 實驗儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 LC-MS/MS篩選METTL21C互作蛋白
        5.2.2 Hsc70含HA標簽超表達載體構(gòu)建
        5.2.3 Hsc70與METTL21C的互作驗證
        5.2.4 Hsc70基因功能驗證
        5.2.5 METTL21C與Hsc70的互作位點鑒定
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 METTL21C互作蛋白的篩選
        5.3.2 Hsc70基因超表達載體構(gòu)建
        5.3.3 Hsc70與METTL21C的互作關(guān)系驗證
        5.3.4 Hsc70和METTL21C互作對成肌分化的影響
        5.3.5 Hsc70與METTL21C互作位點鑒定
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
附錄
    附錄1 主要實驗試劑
    附錄2 主要實驗儀器
攻讀碩士期間取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]略陽烏雞METTL21C基因克隆及超表達載體構(gòu)建[J]. 路宏朝,李蕊清,孫志陽,王令,張濤.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2019(03)
[2]烏雞肌衛(wèi)星細胞的分離培養(yǎng)與鑒定[J]. 李蕊清,趙家榮,孫志陽,孫英英,路宏朝.  中國家禽. 2018(04)
[3]浙東白鵝骨骼肌發(fā)育相關(guān)因子MRFs,Pax3和Pax7基因的表達規(guī)律[J]. 王吟方亭,任婷,朱松會,梁世日,何珂,趙阿勇.  浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報. 2017(06)
[4]安淮山羊骨骼肌衛(wèi)星細胞的分離培養(yǎng)與鑒定[J]. 鄭琪,睢夢華,朱龍,吳昊,丁建平,張運海,凌英會.  安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2017(02)
[5]蛋白質(zhì)翻譯后修飾簡介[J]. 陳霞,羅良煌.  生物學(xué)教學(xué). 2017(02)
[6]非組蛋白甲基化研究進展[J]. 聶茜,陳榮,舒亞南,陳鵬,吳珺,韓梅.  生命的化學(xué). 2015(01)
[7]家禽骨骼肌的生長發(fā)育規(guī)律及調(diào)控[J]. 王月超,蔡輝益,閆海潔,陳曉琳,張姝,張愛華,楊斌,郭軍蕊.  飼料工業(yè). 2014(17)
[8]牛骨骼肌衛(wèi)星細胞的分離鑒定和誘導(dǎo)分化[J]. 王軼敏,代陽,劉新峰,劉中偉,李吉霞,郭宏,丁向彬.  中國畜牧獸醫(yī). 2014(07)
[9]蛋白質(zhì)翻譯后修飾研究進展[J]. 阮班軍,代鵬,王偉,孫建斌,張文濤,顏真,楊靜華.  中國細胞生物學(xué)學(xué)報. 2014(07)
[10]小鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞的分離培養(yǎng)和鑒定[J]. 代陽,王軼敏,劉新峰,樊晗璐,李吉霞,郭宏,丁向彬.  天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報. 2014(01)



本文編號：3732724