發(fā)布時(shí)間：2023-01-12 16:00

　　本研究建立了豬外周血單核細(xì)胞來源樹突狀細(xì)胞體外培養(yǎng)模型,并從免疫發(fā)病豬豬場發(fā)病豬體內(nèi)分離到一株P(guān)RV野毒株,觀察了IRPS和PRV CH-HN野毒株在影響DC成熟和功能中的作用,同時(shí)研究了IRPS在PRV影響DC成熟和功能中的調(diào)節(jié)作用,初步探討PRV的致病機(jī)制,探索IRPS作為免疫增強(qiáng)劑和抗病毒藥物在調(diào)節(jié)DC成熟以及調(diào)節(jié)PRV對(duì)DC成熟和功能影響中的作用機(jī)制。本研究共分五部分,試驗(yàn)一：豬外周血單核細(xì)胞來源樹突狀細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的建立。采用淋巴細(xì)胞分離液梯度離心獲得豬外周血單核細(xì)胞,貼壁法分離目的細(xì)胞,利用IL-4、GM-CSF雙因子法誘導(dǎo)分化未成熟DC,加入LPS 48h刺激成熟。形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)imDCs表面粗糙,有大量褶皺,毛刺樣突起較少,且較短��；而mDCs具有明顯的形態(tài)學(xué)特征,體積增大、表面大量樹枝樣突起。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明不同培養(yǎng)階段豬MoDCs均表達(dá)CD172a、CD1、CD80、CD86和SLA-II-DR（豬MHCⅡ）,且mDCs的CD172a、CD1、CD80、CD86和SLA-Ⅱ-DR表達(dá)率分別為55.2%、53.6%、43.6%、65.4%和61.1%,均較im... 

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
符號(hào)及縮略語
摘要
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 豬樹突狀細(xì)胞的研究進(jìn)展
        1.1 豬樹突狀細(xì)胞來源
            1.1.1 單核細(xì)胞來源DCs(MoDC)
            1.1.2 骨髓造血干細(xì)胞來源DCs(BMDC)
            1.1.3 血液中DCs
            1.1.4 粘膜DCs
        1.2 DCs模式識(shí)別受體對(duì)其配體的識(shí)別
            1.2.1 cDCs對(duì)TLR配體的反應(yīng)
            1.2.2 pDCs對(duì)TLR配體的反應(yīng)
        1.3 豬DCs的抗病毒反應(yīng)
        1.4 豬DCs和淋巴細(xì)胞激活
            1.4.1 DCs和T淋巴細(xì)胞的相互作用
            1.4.2 DCs和B淋巴細(xì)胞的相互作用
        1.5 豬MoDCs模型的優(yōu)勢
    2 板藍(lán)根多糖研究進(jìn)展
        2.1 免疫調(diào)節(jié)作用
        2.2 抗菌抗病毒作用
            2.2.1 抗菌作用
            2.2.2 抗病毒作用
        2.3 抗炎抗毒素作用
        2.4 抗腫瘤作用
    3 豬偽狂犬病研究進(jìn)展
        3.1 PRV病原學(xué)特點(diǎn)
        3.2 疫苗研究進(jìn)展及防治
    4 研究目的及意義
第一章 豬外周血單核細(xì)胞來源樹突狀細(xì)胞的體外培養(yǎng)及鑒定
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 主要試劑
            1.1.2 主要儀器設(shè)備
            1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要試劑配制
        1.3 試驗(yàn)方法
            1.3.1 豬外周MoDC體外誘導(dǎo)培養(yǎng)
            1.3.2 LPS刺激MoDC成熟
            1.3.3 MoDC形態(tài)學(xué)觀察
            1.3.4 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型
            1.3.5 細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)
            1.3.6 同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)
            1.3.7 統(tǒng)計(jì)方法
    2 結(jié)果
        2.1 倒置顯微鏡觀察豬外周MoDC細(xì)胞形態(tài)
        2.2 掃描電鏡觀察豬外周MoDC細(xì)胞形態(tài)
        2.3 流式細(xì)胞儀檢測豬外周MoDC表面分子的表達(dá)
        2.4 豬外周血MoDC吞噬功能
        2.5 同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)
    3 討論
第二章 IRPS對(duì)豬外周血MoDC成熟和功能的作用研究
    1 材料與方法
        1.1 材料和儀器
        1.2 試劑配制
        1.3 試驗(yàn)方法
            1.3.1 豬外周血MoDC體外誘導(dǎo)培養(yǎng)
            1.3.2 試驗(yàn)分組及藥物處理
            1.3.3 MoDC形態(tài)學(xué)觀察
            1.3.4 表型檢測
            1.3.5 細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)
            1.3.6 同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)
            1.3.7 統(tǒng)計(jì)方法
    2 結(jié)果
        2.1 IRPS誘導(dǎo)豬外周血MoDC形態(tài)成熟
            2.1.1 倒置顯微鏡觀察
            2.1.2 掃描電鏡觀察
        2.2 IRPS促進(jìn)豬外周血 MoDC表型成熟
        2.3 IRPS增強(qiáng)豬外周血 MoDC刺激同種異體T細(xì)胞增殖能力
        2.4 IRPS抑制豬外周血MoDC吞噬功能
    3 討論
第三章 高致病性偽狂犬病毒分離鑒定及致病性研究
    1 材料與方法
        1.1 試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 培養(yǎng)基、血清及細(xì)胞
        1.4 樣品采集及處理
        1.5 病毒的分離與鑒定
        1.6 病毒TCID50檢測
        1.7 引物設(shè)計(jì)及基因擴(kuò)增
        1.8 動(dòng)物試驗(yàn)
        1.9 病理學(xué)觀察
    2 結(jié)果
        2.1 病毒分離
        2.2 病毒TCID50檢測
        2.3 序列分析
        2.4 動(dòng)物感染試驗(yàn)
            2.4.1 臨床癥狀
            2.4.2 剖檢病變
            2.4.3 病理組織學(xué)觀察
    3 討論
第四章 PRV感染對(duì)豬外周血 MoDC成熟和功能的影響
    1 材料與方法
        1.1 毒株和細(xì)胞
        1.2 試劑和儀器
        1.3 試劑配制
            1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品的配制
            1.3.2 其他試劑配制
        1.4 試驗(yàn)方法
            1.4.1 豬外周血MoDC體外誘導(dǎo)培養(yǎng)
            1.4.2 病毒培養(yǎng)及感染MoDC
            1.4.3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型
            1.4.4 同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)
            1.4.5 抗體芯片檢測細(xì)胞因子
            1.4.6 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
        2.1 PRV抑制豬外周血MoDC表型成熟
        2.2 PRV抑制豬外周血MoDC刺激同種異體T細(xì)胞增殖能力
        2.3 PRV對(duì)豬外周血MoDC分泌細(xì)胞因子的影響
    3 討論
        3.1 PRV感染對(duì)MoDC表型和功能的影響
        3.2 PRV感染對(duì)MoDC分泌細(xì)胞因子的影響
第五章 IRPS對(duì)PRV抑制對(duì)豬外周血MoDC成熟和功能的影響
    1 材料與方法
        1.1 毒株和細(xì)胞
        1.2 試劑和儀器
        1.3 試劑配制
        1.4 試驗(yàn)方法
            1.4.1 MoDC分離培養(yǎng)
            1.4.2 LPS、IRPS體外刺激Mo DC成熟
            1.4.3 PRV病毒感染Mo DC
            1.4.4 同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)
            1.4.5 細(xì)胞凋亡檢測
            1.4.6 抗體芯片檢測細(xì)胞因子
        1.5 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
        2.1 IRPS對(duì)PRV抑制豬MoDC表型的調(diào)節(jié)
        2.2 IRPS對(duì)PRV抑制豬MoDC刺激T細(xì)胞增殖能力的調(diào)節(jié)
        2.3 IRPS對(duì)PRV影響豬MoDC分泌細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)
        2.4 IRPS對(duì)PRV誘導(dǎo)DC細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)
    3 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
ABSTRACT


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差異性分析[J]. 彭金美,安同慶,趙鴻遠(yuǎn),劉益民,陳家锃,冷超糧,孫艷,常丹,田志軍,童光志.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(01)
[4]不同粉碎度板藍(lán)根抗細(xì)菌內(nèi)毒素作用[J]. 秦傳勇,劉云海.  醫(yī)藥導(dǎo)報(bào). 2012(11)
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[6]紅桂木凝集素對(duì)樹突狀細(xì)胞生長的影響[J]. 王婧娉,李璐,曾麒燕.  廣西醫(yī)學(xué). 2012(06)
[7]板藍(lán)根粗多糖對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用[J]. 耿嬋娟,劉志明,遲曉星,唐彥君.  農(nóng)產(chǎn)品加工(學(xué)刊). 2012(04)
[8]板藍(lán)根多糖對(duì)PRRSV疫苗的免疫增強(qiáng)試驗(yàn)[J]. 麻延峰,王宏艷,傅春泉,周文仙.  家畜生態(tài)學(xué)報(bào). 2011(06)
[9]板藍(lán)根多糖對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)人單核/巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響[J]. 胡佳亮,馮怡,王碩,王源,徐德生,阮克鋒.  上海中醫(yī)藥雜志. 2011(07)
[10]板藍(lán)根多糖對(duì)體外培養(yǎng)雞脾臟淋巴細(xì)胞蛋白激酶C活性的影響[J]. 劉俊玲,張?jiān)?崔保安,張紅英,王學(xué)兵.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2011(11)

博士論文
[1]3種植物多糖抗豬藍(lán)耳病病毒及免疫增強(qiáng)作用研究[D]. 張紅英.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[2]人巨細(xì)胞病毒感染樹突狀細(xì)胞后對(duì)其功能影響及機(jī)制研究[D]. 趙廣圣.浙江大學(xué) 2006

碩士論文
[1]板藍(lán)根多糖對(duì)體外小鼠骨髓衍生的樹突狀細(xì)胞亞群形態(tài)及功能的影響[D]. 張?jiān)?河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]PCV2分離株增殖特性研究及板藍(lán)根多糖、黃芪多糖對(duì)PCV2體外復(fù)制的影響[D]. 李志娟.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]板藍(lán)根多糖的化學(xué)分離及其免疫增強(qiáng)活性的研究[D]. 張弩.華中科技大學(xué) 2008
[4]板藍(lán)根多糖化學(xué)與溶液粘度及免疫調(diào)節(jié)活性的研究[D]. 許桂紅.揚(yáng)州大學(xué) 2006
[5]板藍(lán)根抗流感病毒的生化機(jī)理研究[D]. 吳靈威.福州大學(xué) 2005
[6]樹突狀細(xì)胞在登革病毒感染中的作用研究[D]. 史毓杰.暨南大學(xué) 2005
[7]板藍(lán)根抗病毒有效部位化學(xué)成分的研究[D]. 王福男.沈陽藥科大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3730109