跨膜糖蛋白恒定鏈（invariant china, Ii）在抗原遞呈細(xì)胞內(nèi)主要參與主要組織相容性復(fù)合體（MHC）II類分子與抗原肽復(fù)合物的裝配,其關(guān)鍵活性基團(tuán)（Ii-Key）在此過(guò)程中發(fā)揮重要作用。近些年,Ii-Key已被證實(shí)能夠攜帶單一抗原或抗原肽,有效增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫。PEP-1是一種人工設(shè)計(jì)的細(xì)胞膜穿透肽（Cell penetrating peptide,CPP）,具有克服細(xì)胞膜的屏障作用跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)能力,以非能量、非受體依賴性的方式把蛋白質(zhì)、肽段、寡核苷酸等跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)入各種細(xì)胞的胞漿和胞核內(nèi)。本文基于Ii-Key和PEP-1載體上構(gòu)建異源多表位串聯(lián)肽新型疫苗,為雙重防控雞傳染性法氏囊�。↖nfectious Bursal Disease, IBD）和新城疫（Newcastle disease, ND）提供參考。首先,本文構(gòu)建了Ii-Key與雞傳染性法氏囊病病毒VP2肽表位（aa197-209）和新城疫病毒HN肽表位（aa345-353）的嵌合體,并將嵌合體基因插入pET-32a原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化E.coli Rosetta通過(guò)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),用鎳柱親和層析純化融合蛋白,免疫S... 

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
文獻(xiàn)綜述
引言
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.1.2 質(zhì)粒和菌株
        1.1.3 酶類及相關(guān)試劑
        1.1.4 主要溶液配制
        1.1.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 嵌合體的構(gòu)建及基因合成
        1.2.2 嵌合體原核表達(dá)重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.3 重組質(zhì)粒的表達(dá)及條件優(yōu)化
        1.2.4 融合蛋白表達(dá)形式的鑒定
        1.2.5 融合蛋白的大量提取與純化
        1.2.6 Folin-酚法檢測(cè)融合蛋白濃度
        1.2.7 動(dòng)物免疫
        1.2.8 間接ELISA方法測(cè)定血清效價(jià)
        1.2.9 Western-Blot
        1.2.10 嵌合體真核表達(dá)重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.11 超純真核質(zhì)粒的提取
        1.2.12 293T細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代及細(xì)胞轉(zhuǎn)染
2 結(jié)果與分析
    2.1 原核表達(dá)重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定結(jié)果
        2.1.1 基于Ii-Key的目的片段的PCR擴(kuò)增結(jié)果鑒定
        2.1.2 基于PEP-1和Ii-Key的目的片段的PCR擴(kuò)增結(jié)果鑒定
    2.2 嵌合體蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果
    2.3 融合蛋白表達(dá)形式的鑒定結(jié)果
    2.4 融合蛋白的抗原特異性和體液免疫效應(yīng)
    2.5 VP2/HN和Ii-Key/VP2/HN與MHC Ⅱ類分子細(xì)胞內(nèi)的共定位情況
3 討論
    3.1 Ii-Key作為疫苗載體的效應(yīng)
    3.2 PEP-1的穿膜機(jī)制
    3.3 PEP-1對(duì)Ii-Key的抑制效應(yīng)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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