禽傳染性支氣管炎（Avian infectious bronchitis,IB）是禽傳染性支氣管炎病毒（Avian infectious bronchitis virus,IBV）引起的一種雞的急性、高度接觸性呼吸道傳染病。IBV屬于冠狀病毒科（Coronaviridae）、冠狀病毒屬（Coronavirus）的γ型冠狀病毒,病毒顆粒外包囊膜,內(nèi)含不分節(jié)段的單股正鏈RNA基因組。泛素蛋白酶體系統(tǒng)簡稱為UPS（Ubiquitin–Proteasome System）,能夠降解錯誤折疊或受損的蛋白質(zhì),從而維持細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài),同時(shí)在細(xì)胞周期調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞凋亡、抗原遞呈等許多細(xì)胞生理活動中起著關(guān)鍵的作用。目前有不少報(bào)道表明病毒的感染依賴于UPS,包括MHV等冠狀病毒。然而,UPS對IBV增殖的影響,尚不清楚。本研究以Vero細(xì)胞、H1299細(xì)胞、和雞胚胎成纖維細(xì)胞DF-1為細(xì)胞模型,采用多種方法研究UPS對IBV感染和增殖的作用。一、抑制UPS系統(tǒng),不利于IBV的感染和增殖IBV感染Vero、H1299、或DF-1細(xì)胞,在不同的感染時(shí)間點(diǎn),分別加入蛋白酶體抑制劑MG132、... 

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 傳染性支氣管炎概述
    1.2 傳染性支氣管炎病毒的生活史
        1.2.1 吸附
        1.2.2 內(nèi)吞
        1.2.3 胞內(nèi)運(yùn)輸
        1.2.4 脫殼
        1.2.5 復(fù)制酶復(fù)合物的翻譯與組裝
        1.2.6 復(fù)制和轉(zhuǎn)錄
        1.2.7 翻譯
        1.2.8 病毒的組裝和釋放
    1.3 泛素蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)的概述
        1.3.1 UPS簡介
        1.3.2 泛素化修飾簡介
        1.3.3 蛋白質(zhì)泛素化修飾類型
        1.3.4 UPS的功能
    1.4 UPS與病毒復(fù)制之間的相互作用
        1.4.1 UPS降解細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)
        1.4.2 UPS系統(tǒng)降解病毒蛋白
        1.4.3 病毒蛋白的泛素化和類泛素化修飾
    1.5 結(jié)語
    1.6 本研究的目的及意義
第二章 UPS促進(jìn)冠狀病毒的復(fù)制
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 病毒、病毒抗體和細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.2 細(xì)胞上清和蛋白樣品的收集
        2.2.3 RNA抽提和RT-PCR
        2.2.4 SDS-PAGE和蛋白免疫印跡分析(Western blot)
        2.2.5 細(xì)胞毒性的測定
        2.2.6 擴(kuò)增IBV
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 不同的UPS抑制劑影響IBV的早期階段
        2.3.2 UPS在感染后0-4 小時(shí)促進(jìn)病毒的感染
    2.4 討論
第三章 UPS在IBV內(nèi)吞之后,起始翻譯之前發(fā)揮作用
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 病毒、病毒抗體和細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 IBV感染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        3.2.2 細(xì)胞上清和蛋白樣品的收集
        3.2.3 SDS-PAGE和蛋白免疫印跡分析(Western blot)
        3.2.4 RNA抽提和RT-PCR
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 UPS抑制劑不影響病毒的內(nèi)吞
        3.3.2 UPS在 IBV起始翻譯之前發(fā)揮作用
    3.4 討論
第四章 相關(guān)蛋白的泛素化促進(jìn)IBV入胞
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 病毒、病毒抗體和細(xì)胞
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 IBV感染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        4.2.2 細(xì)胞上清和蛋白樣品的收集
        4.2.3 SDS-PAGE和蛋白免疫印跡分析(Western blot)
        4.2.4 RNA抽提和RT-PCR
        4.2.5 PYR-41藥物抑制實(shí)驗(yàn)
        4.2.6 TCID_(50)測定
        4.2.7 外源表達(dá)泛素質(zhì)粒
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 UPS抑制劑處理減少可利用的游離泛素蛋白單體
        4.3.2 在感染后0-2 小時(shí)抑制蛋白泛素化,明顯抑制病毒復(fù)制
        4.3.3 外源表達(dá)泛素,不影響IBV的入胞和感染效率
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3724290