豬繁殖與呼吸綜合癥（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合癥病毒（PRRSV）引起的一種病毒性傳染病。PRRS導(dǎo)致妊娠母豬嚴(yán)重繁殖障礙，仔豬高死亡率以及各年齡段尤其是仔豬的呼吸道疾病。有研究表明我國優(yōu)良地方品種大蒲蓮豬對(duì)藍(lán)耳病的抗性比西方豬種杜長大雜交豬高。我們分析了感染PRRSV對(duì)模式識(shí)別受體TLR3（Toll-like receptor3TLR3）mRNA表達(dá)的影響；對(duì)TLR3基因啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行了克��；對(duì)大蒲蓮豬、萊蕪豬、長白豬、杜洛克豬四個(gè)品種301個(gè)樣品啟動(dòng)子區(qū)的SNPs（Single nucleotide polymorphisms）進(jìn)行了檢測(cè)；對(duì)TLR3基因的調(diào)控進(jìn)行了初步分析，結(jié)果表明： 1.通過NCBI數(shù)據(jù)庫將豬的TLR3基因氨基酸序列與該基因其他物種氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)其和哺乳動(dòng)物（包括人、猴、馬、小鼠、狗、綿羊、牛、黑猩猩）的同源性較高，其次是雞，而與斑馬魚的同源性較低。 2.利用RT-PCR進(jìn)行表達(dá)譜分析，結(jié)果顯示，TLR3基因在肝、腎、胃、脾、脾中均有明顯的表達(dá)，而... 

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 豬繁殖與呼吸綜合征
        1.1.1 PRRSV 生物學(xué)特征
        1.1.2 PRRS 流行病學(xué)
        1.1.3 PRRSV 致病機(jī)理
        1.1.4 PRRSV 免疫學(xué)反應(yīng)
    1.2 模式識(shí)別受體
    1.3 Toll 樣受體 3 基因研究進(jìn)展
        1.3.1 Toll 樣受體的研究進(jìn)展
        1.3.2 Toll 樣受體 3 基因
        1.3.3 基因啟動(dòng)子區(qū)單核苷酸多態(tài)
    1.4 豬對(duì) PRRSV 抗性差異的研究進(jìn)展
    1.5 肺泡表面活性物質(zhì)研究進(jìn)展
    1.6 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 樣品采集
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 主要試劑及來源
        2.1.5 主要數(shù)據(jù)庫及生物信息學(xué)軟件
        2.1.6 常用試劑的配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 引物序列及 Tm 值
        2.2.2 豬組織基因組 DNA 提取
        2.2.3 總 RNA 的提取
        2.2.4 反轉(zhuǎn)錄獲得 cDNA
        2.2.5 豬 TLR3 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR
        2.2.6 豬 TLR3 基因的 mRNA 表達(dá)分析
        2.2.7 豬 TLR3 基因 5′調(diào)控區(qū)分析
        2.2.8 豬 TLR3 啟動(dòng)子區(qū) SNPs 檢測(cè)
        2.2.9 豬 SP-C、SP-D 肺組織特異性啟動(dòng)子獲得
    2.3 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 總 RNA 的提取
        3.1.1 總 RNA 的檢測(cè)
        3.1.2 總 RNA 反轉(zhuǎn)錄 cDNA
    3.2 豬 TLR3 基因的功能研究
        3.2.1 TLR3 基因部分編碼區(qū)的克隆與同源性分析
        3.2.2 豬 TLR3 基因的 mRNA 表達(dá)分析
        3.2.3 豬 TLR3 基因在攻毒前后 mRNA 表達(dá)分析
    3.3 豬 TLR3 基因表達(dá)調(diào)控
        3.3.1 豬 TLR3 基因啟動(dòng)子區(qū)熒光素酶表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3.2 豬 TLR3 基因啟動(dòng)子刪除試驗(yàn)
        3.3.3 豬 TLR3 基因啟動(dòng)子不同長度片段熒光素酶活性檢測(cè)
        3.3.4 豬 TLR3 基因啟動(dòng)子的生物信息學(xué)分析
        3.3.5 豬 TLR3 基因啟動(dòng)子 mutPRE 定點(diǎn)突變
        3.3.6 豬 TLR3 啟動(dòng)子 SNPs 檢測(cè)
    3.4 豬 SP-C、SP-D 肺組織特異性表達(dá)
        3.4.1 豬 SP-C、SP-D 啟動(dòng)子的獲得
        3.4.2 豬 SP-C、SP-D 紅色熒光蛋白表達(dá)載體構(gòu)建
        3.4.3 豬 SP-C、SP-D 基因啟動(dòng)子肺組織特異性檢測(cè)
4 討論
    4.1 豬 TLR3 基因啟動(dòng)子功能研究
    4.2 豬 SP-C、SP-D 基因啟動(dòng)子功能研究
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬繁殖與呼吸綜合征病毒致病機(jī)理及其抗病育種研究進(jìn)展[J]. 陳婧瑤,劉小娟,王宇航,李笠,胡曉湘,李寧.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(11)
[2]豬繁殖與呼吸綜合征[J]. 楊漢春,劉承棟,宋洵.  今日畜牧獸醫(yī). 2013(08)
[3]信號(hào)分子TRIF的研究進(jìn)展[J]. 解鴻翔,周紅.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2012(02)
[4]豬對(duì)PRRSV易感性差異的研究進(jìn)展[J]. 豐秀靜,曹少先,孟春花,劉鐵錚,王鋒.  畜牧與獸醫(yī). 2010(12)
[5]豬繁殖與呼吸綜合征的免疫學(xué)研究進(jìn)展[J]. 屈雪琪,趙建增,梁智選,李勇,白雪,梅林,溫濤,何斌,楊舉,羅勝軍,邢海云,高英杰.  中國畜牧獸醫(yī). 2010(08)
[6]豬繁殖與呼吸綜合征研究進(jìn)展[J]. 徐娜,李寶玉,柳紀(jì)省.  中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2009(04)
[7]細(xì)胞內(nèi)模式識(shí)別受體研究進(jìn)展[J]. 閆鴻斌,高閃電,賈萬忠,才學(xué)鵬.  免疫學(xué)雜志. 2008(03)
[8]Toll樣受體3及其信號(hào)通路[J]. 謝磊,夏靖燕,趙士芳.  國際口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2008(S1)
[9]單核苷酸多態(tài)性影響基因功能的機(jī)制[J]. 劉越,呂社民.  生命的化學(xué). 2008(02)
[10]宿主細(xì)胞應(yīng)答病毒感染的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究新進(jìn)展[J]. 陽凱,王琛.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2006(12)

博士論文
[1]豬抗PRRSV相關(guān)基因的鑒定及功能分析[D]. 邢鳳.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011

碩士論文
[1]中國奶山羊線粒體DNA D-loop區(qū)遺傳多樣性與起源進(jìn)化研究[D]. 皮秀霜.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]豬PRRSV感染的介導(dǎo)子及CYP3A88的表達(dá)及調(diào)控研究[D]. 蔣成蘭.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]Chaeoglobosin Fex調(diào)控TLR3介導(dǎo)的小鼠樹突狀細(xì)胞的功能[D]. 孫琳.南京大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3721918