發(fā)布時間：2022-12-11 13:28

　　雞球蟲病是一種由艾美爾球蟲引起的腸道疾病,嚴(yán)重影響?zhàn)B禽業(yè)的經(jīng)濟效益,傳統(tǒng)的化學(xué)藥物防治導(dǎo)致食物中藥物殘留,威脅著人類的健康。目前應(yīng)用的球蟲活疫苗存在毒力返強等問題,因此需要一種新型穩(wěn)定高效的替代方法來控制雞球蟲病。雞球蟲子孢子通過其表面蛋白來識別、黏附并入侵腸黏膜上皮細(xì)胞,宿主菌—乳酸菌表達(dá)的目的蛋白與入侵的子孢子表面蛋白相似,同時可激發(fā)有效保護性免疫應(yīng)答。乳酸菌作為抗原傳遞載體已成為疫苗研宄的熱點之一 本研究應(yīng)用L.lactis NZ9000作為宿主菌,將E.tenella子孢子3-1E基因克隆入大腸桿菌-乳酸菌穿梭表達(dá)載體pTX8048中,篩選獲得陽性質(zhì)粒pTX8048-3-1E。將陽性質(zhì)粒pTX8048-3-1E電轉(zhuǎn)化入￡.lactis NZ9000感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)篩選獲得重組陽性菌L.lactis NZ9000-pTX8048-3-1E,重組菌經(jīng)5ng/mL Nisin誘導(dǎo)后,采用Western blot檢測目的蛋白的表達(dá)。將誘導(dǎo)后1×101。CFU L.lactis NZ9000-pTX8048-3-1E分別于5,6,7、15,16,17、25,26,27曰齡三次口服免疫... 

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 雞艾美爾球蟲病概述
        1.1.1 雞球蟲病對養(yǎng)禽業(yè)危害
        1.1.2 雞球蟲臨床癥狀
        1.1.3 雞艾美爾球蟲生命周期
    1.2 雞艾美爾球蟲入侵宿主細(xì)胞
        1.2.1 微線蛋白
        1.2.2 頂膜抗原
        1.2.3 棒狀蛋白
        1.2.4 球蟲表面蛋白
        1.2.5 3-1 E基因
    1.3 宿主抗球蟲免疫應(yīng)答
    1.4 雞球蟲疫苗研究進展
        1.4.1 雞球蟲活疫苗
        1.4.2 雞球蟲重組疫苗
    1.5 乳酸菌作為疫苗載體的研究進展
        1.5.1 乳酸菌與黏膜免疫
        1.5.2 乳酸菌作為表達(dá)載體的優(yōu)勢
        1.5.3 乳酸菌表達(dá)方式
        1.5.4 乳酸鏈球菌素及其表達(dá)系統(tǒng)
    1.6 Toll樣受體2相關(guān)研究進展
    1.7 研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 菌株及質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要試驗儀器設(shè)備
        2.1.4 試驗動物與蟲種
    2.2 試驗方法
        2.2.1 雞E.tenella 3-1E基因在乳酸菌中的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.2 試驗動物分組及取材
        2.2.3 重組乳酸菌免疫保護效果的評估
        2.2.4 脾臟T淋巴細(xì)胞增殖試驗
        2.2.5 脾臟中IL-2與IFN-Y mRNA表達(dá)量檢測
        2.2.6 ChTLR2信號通路中相關(guān)分子QRT-PCR方法的建立
        2.2.7 ChTLR2及其信號通路中三種相關(guān)分子inRNA相對表達(dá)量的檢測
        2.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
3 試驗結(jié)果
    3.1 E.tenella 3-1E基因在乳酸菌中的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.1.1 E.tenella 3-1E基因的亞克隆
        3.1.2 pTX8048-3-1E載體構(gòu)建與鑒定
        3.1.3 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E篩選鑒定
        3.1.4 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E表達(dá)蛋白的Western blot鑒定
    3.2 乳酸菌L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E免疫效果的評估
        3.2.1 體重增重變化
        3.2.2 感染后盲腸病變計分
        3.2.3 卵囊排出減少率
        3.2.4 抗球蟲指數(shù)ACI
    3.3 重組菌L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E免疫保護機制
        3.3.1 脾臟T淋巴細(xì)胞增殖功能變化
        3.3.2 脾臟IL-2、IFN-γ mRNA表達(dá)變化
        3.3.3 ChTLR2信號通路中相關(guān)分子QRT-PCR方法的建立
        3.3.4 脾臟ChTLR2信號通路相關(guān)分子的mRNA表達(dá)變化
4 討論
    4.1 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E的構(gòu)建與表達(dá)
    4.2 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E的免疫保護作用
    4.3 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E免疫后脾臟T淋巴細(xì)胞增殖變化
    4.4 脾臟TLR2信號通路相關(guān)分子mRNA表達(dá)變化
    4.5 脾臟IL-2、IFN-γ變化mRNA表達(dá)變化
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3718861