發(fā)布時間：2022-12-09 23:31

　　MicroRNAs（miRNAs）是一類小分子RNA（21-24nt）,通過與靶標基因的非編碼區(qū)（3’UTR）互補結合,導致nRNA降解或阻斷mRN翻譯,從而調控轉錄后水平基因表達。豬作為主要肉品提供者,首先關注的就是肌肉發(fā)育,肌肉形成是成肌細胞退出細胞周期、表達肌肉特異性基因并阻止其他組織特異性基因表達的一個過程。本課題組前期研究結果發(fā)現(xiàn)：ssc-miR-378在背肌和心肌的表達量明顯高于其它組織；并且發(fā)現(xiàn)ssc-miR-378表達變化情況與肌纖維表達量變化相一致。本研究旨在繼續(xù)開展有關：miR.378調控豬骨骼肌生長發(fā)育的研究,探究miR-378在骨骼肌生長發(fā)育過程中的生物學功能,找出：miR-378引起變化的下游基因及其參與的信號通路,揭示產(chǎn)肉性狀的分子機制,為miRNAs口骨骼肌發(fā)育的研究提供資料。 利用Targetscan網(wǎng)站共預測出191個靶基因,結合DAVID生物信息學軟件篩選與肌肉發(fā)育相關的潛在靶基因：骨形成蛋白2（Bone morphogenetic protein2, BMP2）和絲源活化蛋白激酶1（Mitogen-activated protein kina... 

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 骨骼肌的發(fā)育機制
        1.1 骨骼肌的發(fā)生
        1.2 骨骼肌的形成
        1.3 成年肌的再生
        1.4 影響肌肉生成的調控因子
    2 microRNA的特征
        2.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)和命名
        2.2 miRNA的成熟機制
        2.3 miRNA的作用機制
        2.4 miRNA的生物學功能
    3 肌肉發(fā)育相關miRNAs的研究進展
    4 miRNA靶基因的預測與驗證
        4.1 miRNA靶基因的預測
        4.2 miRNA模擬物(mimics)
        4.3 雙熒光素酶報告驗證靶基因
        4.4 qPCR檢測miRNA在轉錄水平上對靶基因的調控
    5 研究目的與意義
第二章 材料與方法
    1 材料
        1.1 實驗樣品與采集
        1.2 主要儀器與設備
        1.3 試劑耗材
        1.4 溶液試劑的配置
        1.5 生物信息學網(wǎng)站與分析軟件
        1.6 實驗設計方案
    2 方法
        2.1 實驗樣品采集
        2.2 引物設計
        2.3 實驗中應注意的事項
        2.4 miR-378靶基因的選定
        2.5 引物設計
        2.6 DNA的提取
        2.7 PCR擴增MAPK1 3'UTR和BMP2 3'UTR
        2.8 構建正常靶標載體
        2.9 突變載體的構建
        2.10 PK15和PIEC細胞的培養(yǎng)
        2.11 mimics與靶標載體共轉染
        2.12 雙熒光素酶報告驗證靶基因
        2.13 轉錄水平上驗證靶基因MAPK1和BMP2
        2.14 BMP2和MAPK1的生物信息學分析
第三章 結果與分析
    1 miR-378靶基因的選定
        1.1 Targetscan預測miR-378靶基因結果
        1.2 基因的聚類分析篩選靶基因
        1.3 MAPK1和BMP2結合位點的保守性分析
    2 DNA質量檢測結果
    3 PCR擴增目的片段
    4 構建正常靶標載體
        4.1 正常靶標載體psi-Check2-MAPK1 3'UTR的構建
        4.2 正常靶標載體Psi-Check2-BMP2 3'UTR的構建
    5 mimics和靶標載體共轉染
        5.1 豬腎細胞PK15共轉染結果
        5.2 豬血管內皮細胞PIEC轉染結果
    6 雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測結果
        6.1 雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)驗證靶標基因MAPK1
        6.2 雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)驗證靶標基因BMP2
    7 RNA質量檢測結果
    8 qPCR結果
    9 推測miR-378調控肌肉發(fā)育的機制
第四章 討論
    1 靶標驗證
    2 有關miR-378研究的討論
    3 有關miR-378調控BMP2和MAPKl的討論
第五章 結論
參考文獻
英文縮略表
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]microRNA與腫瘤[J]. 周凡,莊詩美.  生命科學. 2008(02)
[2]轉錄因子MEF2對多種信號通路的調節(jié)及其生物學作用[J]. 張文煒,徐列明.  中國生物化學與分子生物學報. 2004(04)



本文編號：3715588