Toll樣受體屬于天然免疫因子,在感染初期通過(guò)識(shí)別病原體相關(guān)分子模式,啟動(dòng)信號(hào)傳遞發(fā)揮抗感染作用,從而清除病原微生物的侵害。鵝是我國(guó)飼養(yǎng)較多的水禽之一,因生長(zhǎng)環(huán)境的影響,易發(fā)生禽流感等傳染性疾病,現(xiàn)有疫苗不能提供全部的保護(hù)作用,從天然免疫角度增強(qiáng)抗病性已經(jīng)成為研究的熱點(diǎn)。目前在哺乳動(dòng)物中對(duì)于TLRs的研究較為廣泛,在禽類(lèi)中尤其是鵝TLR4的研究較少。本試驗(yàn)擬對(duì)三花鵝TLR4基因胞外區(qū)進(jìn)行克隆和序列分析,在H5亞型禽流感疫苗誘導(dǎo)下,采用免疫組織化學(xué)方法和半定量PCR技術(shù)對(duì)三花鵝TLR4及相關(guān)免疫因子的表達(dá)情況進(jìn)行初步分析,探究TLR4免疫功能發(fā)生機(jī)制,結(jié)果如下:（1）克隆三花鵝TLR4基因胞外區(qū)片段,大小為998 bp,編碼304個(gè)氨基酸殘基;與已知朗德鵝序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),共有9個(gè)核苷酸突變位點(diǎn),導(dǎo)致2個(gè)氨基酸位點(diǎn)發(fā)生改變。核苷酸及氨基酸進(jìn)化樹(shù)分析發(fā)現(xiàn),三花鵝TLR4與朗德鵝和馬崗鵝同源性最高,在禽類(lèi)中較為保守,與哺乳類(lèi)、魚(yú)類(lèi)等同源性較低,具有種屬特異性。（2）構(gòu)建三花鵝TLR4胞外區(qū)重組表達(dá)載體,表達(dá)的重組蛋白大小約為38 kD;利用切膠純化方法獲得特異性蛋白免疫家兔,得到兔抗鵝TLR4胞... 

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 Toll樣受體的概述
        1.1.1 Toll樣受體的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 Toll樣受體作用的分子機(jī)制
        1.1.3 Toll樣受體的組織分布
    1.2 哺乳動(dòng)物TLRs的研究進(jìn)展
        1.2.1 哺乳動(dòng)物TLRs的分子特征
        1.2.2 哺乳動(dòng)物TLRs的生物學(xué)功能
    1.3 家禽TLRs的研究進(jìn)展
        1.3.1 家禽TLRs的分子結(jié)構(gòu)
        1.3.2 家禽TLRs的生物學(xué)功能
        1.3.3 鵝Toll樣受體4的分子生物學(xué)研究
    1.4 禽流感的研究進(jìn)展
        1.4.1 流行情況
        1.4.2 疫苗的研究
        1.4.3 相關(guān)免疫因子的影響
        1.4.4 病理變化
    1.5 研究目的及意義
第2章 三花鵝TLR4基因胞外區(qū)的克隆、原核表達(dá)及多克隆抗體的制備
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 載體、菌株和相對(duì)分子質(zhì)量
        2.1.3 引物
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 主要生化試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 三花鵝TLR4基因胞外區(qū)的克隆
        2.2.2 重組原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 三花鵝TLR4胞外區(qū)多克隆抗體的制備
        2.2.4 生物信息學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 三花鵝肝組織RNA的提取
        2.3.2 三花鵝TLR4 基因胞外區(qū)RT-PCR擴(kuò)增
        2.3.3 重組質(zhì)粒p MD18-T-TLR4 的鑒定
        2.3.4 重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-32a-TLR4ER的鑒定
        2.3.5 表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)
        2.3.6 三花鵝TLR4胞外區(qū)初級(jí)結(jié)構(gòu)特征
        2.3.7 三花鵝TLR4蛋白胞外區(qū)高級(jí)結(jié)構(gòu)特征
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第3章 三花鵝TLR4基因及相關(guān)免疫因子在不同組織的表達(dá)
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及樣品處理
        3.1.2 主要生化試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.1.4 引物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 鵝TLR4基因及相關(guān)免疫因子的檢測(cè)
        3.2.2 鵝TLR4的免疫組織化學(xué)檢測(cè)
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 鵝TLR4基因及相關(guān)免疫因子的檢測(cè)
        3.3.2 鵝TLR4在不同組織中的分布
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號(hào)：3714668