Toll樣受體屬于天然免疫因子,在感染初期通過識別病原體相關分子模式,啟動信號傳遞發(fā)揮抗感染作用,從而清除病原微生物的侵害。鵝是我國飼養(yǎng)較多的水禽之一,因生長環(huán)境的影響,易發(fā)生禽流感等傳染性疾病,現(xiàn)有疫苗不能提供全部的保護作用,從天然免疫角度增強抗病性已經(jīng)成為研究的熱點。目前在哺乳動物中對于TLRs的研究較為廣泛,在禽類中尤其是鵝TLR4的研究較少。本試驗擬對三花鵝TLR4基因胞外區(qū)進行克隆和序列分析,在H5亞型禽流感疫苗誘導下,采用免疫組織化學方法和半定量PCR技術對三花鵝TLR4及相關免疫因子的表達情況進行初步分析,探究TLR4免疫功能發(fā)生機制,結果如下:（1）克隆三花鵝TLR4基因胞外區(qū)片段,大小為998 bp,編碼304個氨基酸殘基;與已知朗德鵝序列比對發(fā)現(xiàn),共有9個核苷酸突變位點,導致2個氨基酸位點發(fā)生改變。核苷酸及氨基酸進化樹分析發(fā)現(xiàn),三花鵝TLR4與朗德鵝和馬崗鵝同源性最高,在禽類中較為保守,與哺乳類、魚類等同源性較低,具有種屬特異性。（2）構建三花鵝TLR4胞外區(qū)重組表達載體,表達的重組蛋白大小約為38 kD;利用切膠純化方法獲得特異性蛋白免疫家兔,得到兔抗鵝TLR4胞... 

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 Toll樣受體的概述
        1.1.1 Toll樣受體的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 Toll樣受體作用的分子機制
        1.1.3 Toll樣受體的組織分布
    1.2 哺乳動物TLRs的研究進展
        1.2.1 哺乳動物TLRs的分子特征
        1.2.2 哺乳動物TLRs的生物學功能
    1.3 家禽TLRs的研究進展
        1.3.1 家禽TLRs的分子結構
        1.3.2 家禽TLRs的生物學功能
        1.3.3 鵝Toll樣受體4的分子生物學研究
    1.4 禽流感的研究進展
        1.4.1 流行情況
        1.4.2 疫苗的研究
        1.4.3 相關免疫因子的影響
        1.4.4 病理變化
    1.5 研究目的及意義
第2章 三花鵝TLR4基因胞外區(qū)的克隆、原核表達及多克隆抗體的制備
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 載體、菌株和相對分子質量
        2.1.3 引物
        2.1.4 主要儀器設備
        2.1.5 主要生化試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 三花鵝TLR4基因胞外區(qū)的克隆
        2.2.2 重組原核表達載體的構建
        2.2.3 三花鵝TLR4胞外區(qū)多克隆抗體的制備
        2.2.4 生物信息學分析
    2.3 結果
        2.3.1 三花鵝肝組織RNA的提取
        2.3.2 三花鵝TLR4 基因胞外區(qū)RT-PCR擴增
        2.3.3 重組質粒p MD18-T-TLR4 的鑒定
        2.3.4 重組表達質粒p ET-32a-TLR4ER的鑒定
        2.3.5 表達產(chǎn)物的檢測
        2.3.6 三花鵝TLR4胞外區(qū)初級結構特征
        2.3.7 三花鵝TLR4蛋白胞外區(qū)高級結構特征
    2.4 討論
    2.5 本章小結
第3章 三花鵝TLR4基因及相關免疫因子在不同組織的表達
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物及樣品處理
        3.1.2 主要生化試劑
        3.1.3 主要儀器設備
        3.1.4 引物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 鵝TLR4基因及相關免疫因子的檢測
        3.2.2 鵝TLR4的免疫組織化學檢測
    3.3 結果
        3.3.1 鵝TLR4基因及相關免疫因子的檢測
        3.3.2 鵝TLR4在不同組織中的分布
    3.4 討論
    3.5 本章小結
結論
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文
致謝



本文編號：3714668