鵝細(xì)小病毒（GPV）屬細(xì)小病毒科（parvoviridae）、細(xì)小病毒屬（parvovirus）,主要引起小鵝瘟,近年來,其在鴨群中可引起鴨大舌短喙綜合征。鴨圓環(huán)病毒（DuCV）感染可導(dǎo)致宿主免疫抑制,通常與其他病原體共同感染使疾病進(jìn)展更加復(fù)雜。GPV與DuCV共感染在田間廣泛存在,但目前對(duì)GPV與DuCV共感染對(duì)宿主的影響情況不明。為探究GPV和DuCV是否協(xié)同增強(qiáng)了致病性,本研究通過臨床病例分離鑒定了GPV與DuCV;通過建立GPV與DuCV共感染的動(dòng)物模型,以病毒學(xué)、病理學(xué)、分子生物學(xué)等方法進(jìn)行了GPV與DuCV協(xié)同復(fù)制與協(xié)同致病研究。病毒分離鑒定結(jié)果顯示,分離得到的GPV與DuCV均為當(dāng)前田間流行株,并制備了GPV多克隆抗體和DuCV多克隆抗體用于實(shí)驗(yàn)檢測。將GPV與DuCV腹腔接種于2日齡櫻桃谷肉鴨,在感染后第10天、第20天和第30天進(jìn)行剖殺。GPV與DuCV共感染鴨表現(xiàn)精神沉郁,生長發(fā)育遲緩,羽毛凌亂,體重增長顯著緩慢。血涂片觀察可見共感染組鴨血液中異嗜性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞明顯增多。對(duì)血清中各種酶活力指標(biāo)進(jìn)行檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn),感染前期共感染組谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）水平顯著高于單... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 鵝細(xì)小病毒研究概述
        1.1.1 病毒特征
        1.1.2 流行病學(xué)研究
        1.1.3 臨床癥狀
        1.1.4 病理變化
    1.2 鴨圓環(huán)病毒的研究概述
        1.2.1 病原體的特征
        1.2.2 流行病學(xué)
        1.2.3 臨床癥狀
        1.2.4 病理變化
    1.3 病毒共感染研究進(jìn)展
    1.4 GPV與DuCV共感染研究現(xiàn)狀
    1.5 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 病毒
        2.1.2 鴨胚、細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備、器材
        2.1.5 試驗(yàn)地點(diǎn)
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 DuCV分離與增殖
        2.2.2 GPV分離與增殖
        2.2.3 GPV多克隆抗體及DuCV多克隆抗體的制備
        2.2.4 GPV、DuCV共感染模型的建立
        2.2.5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果
    3.1 病毒分離與增殖
        3.1.1 DuCV分離鑒定
        3.1.2 DuCV半數(shù)感染量（ID50）檢測
        3.1.3 GPV PCR鑒定
        3.1.4 GPV ELISA鑒定
        3.1.5 GPV回歸動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        3.1.6 GPV半數(shù)細(xì)胞感染量（TCID50）檢測
    3.2 GPV多克隆抗體制備
        3.2.1 GPV vp3基因的獲取
        3.2.2 GPV VP3重組質(zhì)粒鑒定
        3.2.3 GPV VP3蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.4 GPV VP3蛋白的純化
        3.2.5 GPV VP3蛋白濃度測定
        3.2.6 GPV VP3蛋白Western Blot檢測
        3.2.7 GPV多克隆抗體效價(jià)
        3.2.8 GPV多克隆抗體驗(yàn)證
    3.3 DuCV多克隆抗體制備結(jié)果
        3.3.1 DuCV cap基因的獲取
        3.3.2 DuCV CAP重組質(zhì)粒鑒定
        3.3.3 DuCV CAP蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.3.4 DuCV CAP蛋白的純化
        3.3.5 DuCV CAP蛋白濃度測定
        3.3.6 DuCV CAP蛋白Western Blot檢測
        3.3.7 DuCV多克隆抗體效價(jià)
        3.3.8 DuCV多克隆抗體驗(yàn)證
    3.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接種GPV、DuCV共感染的人工致病實(shí)驗(yàn)
        3.4.1 臨床癥狀
        3.4.2 大體病變
        3.4.3 血液學(xué)檢測
        3.4.4 病理組織學(xué)病變
        3.4.5 病毒載量檢測
        3.4.6 病原分布檢測
4 討論
    4.1 GPV、DuCV協(xié)同增強(qiáng)致病性
    4.2 GPV、DuCV共感染促進(jìn)雙方病毒復(fù)制
5.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]新城疫病毒單感染及豬流感病毒與豬鏈球菌共感染差異蛋白組學(xué)分析[D]. 黨源.吉林大學(xué) 2013
[3]鴨圓環(huán)病毒的分子流行病學(xué)調(diào)查及診斷方法的建立[D]. 張興曉.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[4]小鵝瘟強(qiáng)毒在人工感染雛鵝體內(nèi)侵染規(guī)律及對(duì)消化道菌群結(jié)構(gòu)影響的分子解析[D]. 楊金龍.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]鵝細(xì)小病毒與鴨圓環(huán)病毒共感染誘發(fā)鴨大舌—短喙綜合征[D]. 朱東芹.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]鵝細(xì)小病毒的分離鑒定及其全基因測序及結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)[D]. 徐浩.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]鴨圓環(huán)病毒的流行病學(xué)調(diào)查[D]. 劉少寧.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[4]鵝細(xì)小病毒常州株NS1和VP1基因序列分析及NS1基因的表達(dá)[D]. 陳希.揚(yáng)州大學(xué) 2007
[5]小鵝瘟病毒強(qiáng)毒株細(xì)胞適應(yīng)毒的培育及其VP3基因的表達(dá)[D]. 李清.揚(yáng)州大學(xué) 2007
[6]鵝細(xì)小病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS2基因的克隆及原核表達(dá)[D]. 邢明偉.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2002



本文編號(hào)：3712138