近年來，肥胖已成為全球關(guān)注的熱點(diǎn)問題，它逐漸成為威脅人們健康的殺手之一，是造成II型糖尿病及心腦血管疾病的主要原因。脂肪沉積是由于脂肪細(xì)胞體積的增大或脂肪細(xì)胞數(shù)目的增多，即脂肪細(xì)胞的分化和成熟，是涉及多種調(diào)控因子作用的復(fù)雜過程。BAMBI是最近發(fā)現(xiàn)的調(diào)控脂肪形成的因子。BAMBI是含有260個(gè)氨基酸的橫跨膜糖蛋白，因其與TGF超家族I型受體的結(jié)構(gòu)相似，又稱其為TGF超家族的偽受體。大量的資料顯示，BAMBI參與機(jī)體多個(gè)生理及病理過程的調(diào)控。此外，在癌癥上的研究也顯示BAMBI與Wnt/β-catenin信號通路等多個(gè)信號通路有密切的聯(lián)系，在成脂過程的研究也初步證實(shí)BAMBI可能抑制脂肪細(xì)胞分化，但具體的作用機(jī)制尚不明確。因此，本實(shí)驗(yàn)利用干擾及超表達(dá)的手段，減少或增加BAMBI的表達(dá)，通過油紅O染色、實(shí)時(shí)定量PCR（real-time qPCR）、蛋白印跡（western blot）等技術(shù)，闡明BAMBI在豬前體脂肪細(xì)胞分化過程的作用機(jī)制，得到的研究結(jié)果如下： 1. BAMBI基因在3日齡及180日齡豬各組織中均有表達(dá)，其中在腎臟中的表達(dá)量最高，在脂肪組織中表達(dá)量適中；BAMBI在... 

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 BAMBI 概述
    1.1 BAMBI 的發(fā)現(xiàn)
    1.2 BAMBI 的結(jié)構(gòu)
    1.3 BAMBI 與疾病
    1.4 BAMBI 與組織發(fā)育
    1.5 BAMBI 的作用機(jī)制
    1.6 BAMBI 對脂肪細(xì)胞分化作用的初步研究
第二章 Wnt/β‐catenin 信號通路與脂肪細(xì)胞分化
    2.1 Wnt/β‐catenin 信號通路簡介
        2.1.1 Wnts
        2.1.2 Frizzled
        2.1.3 LRP5/6
        2.1.4 Dishevelled
        2.1.5 β‐catenin
        2.1.6 GSK‐3
        2.1.7 Axin
        2.1.8 APC
        2.1.9 TCF/LEF
    2.2 Wnt/β‐catenin 信號通路的作用機(jī)制
    2.3 Wnt/β‐catenin 信號通路與脂肪形成
前言
第三章 豬 BAMBI 基因的組織及時(shí)序表達(dá)模式
    3.1 材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 豬組織樣采集
        3.2.2 豬前體脂肪細(xì)胞分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化
        3.2.3 RNA 提取
        3.2.4 RNA 的反轉(zhuǎn)錄
        3.2.5 real‐time qPCR 檢測 BAMBI mRNA 表達(dá)
        3.2.6 細(xì)胞總蛋白提取
        3.2.7 Western blotting
    3.3 數(shù)據(jù)分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 3 日齡與 180 日齡大白豬中 BAMBI 的組織表達(dá)譜
        3.4.2 BAMBI 在體內(nèi)及體外條件下豬前體脂肪細(xì)胞分化過程中的表達(dá)模式
        3.4.3 BAMBI 在豬前體脂肪細(xì)胞分化過程的表達(dá)情況
    3.5 討論
第四章 干擾 BAMBI 促進(jìn)豬前體脂肪細(xì)胞分化
    4.1 材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    4.2 方法
        4.2.1 豬 pLentiH1‐BAMBI shRNA 的構(gòu)建
        4.2.2 慢病毒的包裝
        4.2.3 慢病毒滴度的測定
        4.2.4 慢病毒侵染豬前體脂肪細(xì)胞
        4.2.5 豬前體脂肪細(xì)胞分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化
        4.2.6 油紅 O 染色及提取
        4.2.7 細(xì)胞總 RNA 及蛋白提取
        4.2.8 Real‐time qPCR
        4.2.9 Western blotting
    4.3 數(shù)據(jù)分析
    4.4 結(jié)果分析
        4.4.1 BAMBI 慢病毒干擾載體的構(gòu)建
        4.4.2 pLentiH1‐BAMBI shRNA1/2/3 慢病毒的包裝與侵染豬前體脂肪細(xì)胞
        4.4.3 pLentiH1‐BAMBI shRNA1/2/3 慢病毒干擾效率檢測
        4.4.4 干擾 BAMBI 后促進(jìn)豬前體脂肪細(xì)胞分化
    4.5 討論
第五章 超表達(dá) BAMBI 抑制豬前體脂肪細(xì)胞分化
    5.1 材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 Ad‐BAMBI 超表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.2.2 Ad‐BAMBI 超表達(dá)載體的包裝、擴(kuò)繁
        5.2.3 腺病毒滴度測定
        5.2.4 腺病毒侵染豬前體脂肪細(xì)胞
        5.2.5 豬前體脂肪細(xì)胞分離培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化
        5.2.6 油紅 O 染色及提取
        5.2.7 細(xì)胞總 RNA 及蛋白提取
        5.2.8 Real‐time qPCR
        5.2.9 Western blotting
    5.3 數(shù)據(jù)分析
    5.4 結(jié)果分析
        5.4.1 BAMBI 重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定
        5.4.2 BAMBI 重組腺病毒的包裝、擴(kuò)繁及滴度測定
        5.4.3 Ad‐BAMBI 侵染豬前體脂肪細(xì)胞及超表達(dá)效率檢測
        5.4.4 超表達(dá) BAMBI 抑制豬前體脂肪細(xì)胞分化
    5.5 討論
第六章 BAMBI 與 Wnt/β‐catenin 信號通路在成脂過程的作用機(jī)制
    6.1 材料
        6.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 慢病毒侵染豬前體脂肪細(xì)胞
        6.2.2 腺病毒侵染豬前體脂肪細(xì)胞
        6.2.3 油紅 O 染色及提取
        6.2.4 細(xì)胞總 RNA 及蛋白提取
        6.2.5 細(xì)胞核蛋白提取
        6.2.6 Real‐time qPCR
        6.2.7 Western blotting
    6.3 數(shù)據(jù)分析
    6.4 結(jié)果分析
        6.4.1 BAMBI 促進(jìn) Wnt/β‐catenin 信號通路抑制豬前體脂肪細(xì)胞分化
        6.4.2 不同濃度 LiCl 對豬前體脂肪細(xì)胞分化的影響
        6.4.3 超表達(dá) BAMBI 促進(jìn) LiCl 對豬前體脂肪細(xì)胞分化的抑制作用
    6.5 討論
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
需進(jìn)一步研究的問題
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]LiCl激活經(jīng)典Wnt信號通路誘導(dǎo)豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞向慢肌分化[J]. 楊秋梅,劉月光,沈清武,史新娥,楊公社.  中國畜牧雜志. 2012(11)
[2]慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾Akt2表達(dá)抑制豬前體脂肪細(xì)胞分化[J]. 王平,熊燕,楊公社,沈清武,龐衛(wèi)軍.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2012(01)
[3]Prognostic significance of BMP and activin membrane-bound inhibitor in colorectal cancer[J]. Nozomi Togo,Susumu Ohwada,Shinji Sakurai,Hiroyuki Toya,Ichiro Sakamoto,Tatsuya Yamada,Tetsuhiro Nakano,Ken Muroya,Izumi Takeyoshi,Takashi Nakajima,Takashi Sekiya,Yusuke Yamazumi,Tsutomu Nakamura,Tetsu Akiyama.  World Journal of Gastroenterology. 2008(31)



本文編號：3711870