發(fā)布時間：2022-12-07 00:07

　　近年來，肥胖已成為全球關(guān)注的熱點問題，它逐漸成為威脅人們健康的殺手之一，是造成II型糖尿病及心腦血管疾病的主要原因。脂肪沉積是由于脂肪細胞體積的增大或脂肪細胞數(shù)目的增多，即脂肪細胞的分化和成熟，是涉及多種調(diào)控因子作用的復(fù)雜過程。BAMBI是最近發(fā)現(xiàn)的調(diào)控脂肪形成的因子。BAMBI是含有260個氨基酸的橫跨膜糖蛋白，因其與TGF超家族I型受體的結(jié)構(gòu)相似，又稱其為TGF超家族的偽受體。大量的資料顯示，BAMBI參與機體多個生理及病理過程的調(diào)控。此外，在癌癥上的研究也顯示BAMBI與Wnt/β-catenin信號通路等多個信號通路有密切的聯(lián)系，在成脂過程的研究也初步證實BAMBI可能抑制脂肪細胞分化，但具體的作用機制尚不明確。因此，本實驗利用干擾及超表達的手段，減少或增加BAMBI的表達，通過油紅O染色、實時定量PCR（real-time qPCR）、蛋白印跡（western blot）等技術(shù)，闡明BAMBI在豬前體脂肪細胞分化過程的作用機制，得到的研究結(jié)果如下： 1. BAMBI基因在3日齡及180日齡豬各組織中均有表達，其中在腎臟中的表達量最高，在脂肪組織中表達量適中；BAMBI在... 

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 BAMBI 概述
    1.1 BAMBI 的發(fā)現(xiàn)
    1.2 BAMBI 的結(jié)構(gòu)
    1.3 BAMBI 與疾病
    1.4 BAMBI 與組織發(fā)育
    1.5 BAMBI 的作用機制
    1.6 BAMBI 對脂肪細胞分化作用的初步研究
第二章 Wnt/β‐catenin 信號通路與脂肪細胞分化
    2.1 Wnt/β‐catenin 信號通路簡介
        2.1.1 Wnts
        2.1.2 Frizzled
        2.1.3 LRP5/6
        2.1.4 Dishevelled
        2.1.5 β‐catenin
        2.1.6 GSK‐3
        2.1.7 Axin
        2.1.8 APC
        2.1.9 TCF/LEF
    2.2 Wnt/β‐catenin 信號通路的作用機制
    2.3 Wnt/β‐catenin 信號通路與脂肪形成
前言
第三章 豬 BAMBI 基因的組織及時序表達模式
    3.1 材料
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 豬組織樣采集
        3.2.2 豬前體脂肪細胞分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化
        3.2.3 RNA 提取
        3.2.4 RNA 的反轉(zhuǎn)錄
        3.2.5 real‐time qPCR 檢測 BAMBI mRNA 表達
        3.2.6 細胞總蛋白提取
        3.2.7 Western blotting
    3.3 數(shù)據(jù)分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 3 日齡與 180 日齡大白豬中 BAMBI 的組織表達譜
        3.4.2 BAMBI 在體內(nèi)及體外條件下豬前體脂肪細胞分化過程中的表達模式
        3.4.3 BAMBI 在豬前體脂肪細胞分化過程的表達情況
    3.5 討論
第四章 干擾 BAMBI 促進豬前體脂肪細胞分化
    4.1 材料
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗試劑
    4.2 方法
        4.2.1 豬 pLentiH1‐BAMBI shRNA 的構(gòu)建
        4.2.2 慢病毒的包裝
        4.2.3 慢病毒滴度的測定
        4.2.4 慢病毒侵染豬前體脂肪細胞
        4.2.5 豬前體脂肪細胞分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化
        4.2.6 油紅 O 染色及提取
        4.2.7 細胞總 RNA 及蛋白提取
        4.2.8 Real‐time qPCR
        4.2.9 Western blotting
    4.3 數(shù)據(jù)分析
    4.4 結(jié)果分析
        4.4.1 BAMBI 慢病毒干擾載體的構(gòu)建
        4.4.2 pLentiH1‐BAMBI shRNA1/2/3 慢病毒的包裝與侵染豬前體脂肪細胞
        4.4.3 pLentiH1‐BAMBI shRNA1/2/3 慢病毒干擾效率檢測
        4.4.4 干擾 BAMBI 后促進豬前體脂肪細胞分化
    4.5 討論
第五章 超表達 BAMBI 抑制豬前體脂肪細胞分化
    5.1 材料
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 實驗試劑
    5.2 實驗方法
        5.2.1 Ad‐BAMBI 超表達載體的構(gòu)建
        5.2.2 Ad‐BAMBI 超表達載體的包裝、擴繁
        5.2.3 腺病毒滴度測定
        5.2.4 腺病毒侵染豬前體脂肪細胞
        5.2.5 豬前體脂肪細胞分離培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化
        5.2.6 油紅 O 染色及提取
        5.2.7 細胞總 RNA 及蛋白提取
        5.2.8 Real‐time qPCR
        5.2.9 Western blotting
    5.3 數(shù)據(jù)分析
    5.4 結(jié)果分析
        5.4.1 BAMBI 重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定
        5.4.2 BAMBI 重組腺病毒的包裝、擴繁及滴度測定
        5.4.3 Ad‐BAMBI 侵染豬前體脂肪細胞及超表達效率檢測
        5.4.4 超表達 BAMBI 抑制豬前體脂肪細胞分化
    5.5 討論
第六章 BAMBI 與 Wnt/β‐catenin 信號通路在成脂過程的作用機制
    6.1 材料
        6.1.1 實驗材料
        6.1.2 實驗試劑
    6.2 實驗方法
        6.2.1 慢病毒侵染豬前體脂肪細胞
        6.2.2 腺病毒侵染豬前體脂肪細胞
        6.2.3 油紅 O 染色及提取
        6.2.4 細胞總 RNA 及蛋白提取
        6.2.5 細胞核蛋白提取
        6.2.6 Real‐time qPCR
        6.2.7 Western blotting
    6.3 數(shù)據(jù)分析
    6.4 結(jié)果分析
        6.4.1 BAMBI 促進 Wnt/β‐catenin 信號通路抑制豬前體脂肪細胞分化
        6.4.2 不同濃度 LiCl 對豬前體脂肪細胞分化的影響
        6.4.3 超表達 BAMBI 促進 LiCl 對豬前體脂肪細胞分化的抑制作用
    6.5 討論
結(jié)論
創(chuàng)新點
需進一步研究的問題
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]LiCl激活經(jīng)典Wnt信號通路誘導(dǎo)豬骨骼肌衛(wèi)星細胞向慢肌分化[J]. 楊秋梅,劉月光,沈清武,史新娥,楊公社.  中國畜牧雜志. 2012(11)
[2]慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾Akt2表達抑制豬前體脂肪細胞分化[J]. 王平,熊燕,楊公社,沈清武,龐衛(wèi)軍.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2012(01)
[3]Prognostic significance of BMP and activin membrane-bound inhibitor in colorectal cancer[J]. Nozomi Togo,Susumu Ohwada,Shinji Sakurai,Hiroyuki Toya,Ichiro Sakamoto,Tatsuya Yamada,Tetsuhiro Nakano,Ken Muroya,Izumi Takeyoshi,Takashi Nakajima,Takashi Sekiya,Yusuke Yamazumi,Tsutomu Nakamura,Tetsu Akiyama.  World Journal of Gastroenterology. 2008(31)



本文編號：3711870