極光激酶A （aurora kinase A, AURKA）是細胞周期有絲分裂調(diào)節(jié)蛋白激酶之一,參與調(diào)控生殖細胞的發(fā)生和成熟。研究表明AURKA是雄激素受體（androgen receptor, AR）的靶基因,雙氫睪酮（dihydrotestosterone, DHT）與胞內(nèi)AR結合后促進精子成熟。因此,探究AURKA與DHT的作用機制對雄性動物生殖及相關疾病的研究有重要意義,但其具體作用及機制尚不完全清楚。本研究采集8周齡昆明雄性小鼠（Mus musculus）下丘腦、垂體和睪丸組織生殖軸器官組織,通過半定量PCR、免疫印跡（Western blot, WB）、蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining, HE）和免疫組化學染色（immunohistochemistry,IHC）,探究AURKA在雄性小鼠性腺軸的表達規(guī)律及定位。設計AURKA-siRNA干擾序列,轉(zhuǎn)染原代成年小鼠睪丸支持細胞,利用實時熒光定量PCR （real-time fluorescent quantitative PCR, q RT-PCR）和WB檢測轉(zhuǎn)染24 h后,細胞AURKA... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗材料
    1.2 試劑
    1.3 方法
        1.3.1 總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        1.3.2 引物設計
        1.3.3 半定量PCR
        1.3.4 實時熒光定量PCR (real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)
        1.3.5 免疫印跡(Western blot,WB)
        1.3.6 蘇木精-伊紅染色及免疫組化
        1.3.7 細胞轉(zhuǎn)染過程
        1.3.8 酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immuno-sorbent assay,ELISA)
        1.3.9 統(tǒng)計學分析
2 結果與分析
    2.1 雄性小鼠下丘腦-垂體-睪丸組織中AURKA的表達規(guī)律
    2.2 雄性小鼠下丘腦-垂體-睪丸組織中AURKA表達定位
    2.3 小鼠睪丸支持細胞轉(zhuǎn)染AURKA-siRNA對AURKA表達效率的影響
    2.4 小鼠睪丸支持細胞轉(zhuǎn)染AURKA-siRNA對SRD5A1的影響
    2.5 小鼠睪丸支持細胞轉(zhuǎn)染AURKA-siRNA后DHT含量變化
3 討論
4 結論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3708476