旨在探究缺失、小的、同源異形1（absent, small, or homeotic 1-like,ASH1L）甲基轉(zhuǎn)移酶在牛卵丘細(xì)胞中的表達(dá)與功能。本研究通過(guò)免疫熒光染色在健康母牛卵丘細(xì)胞中對(duì)ASH1L甲基轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行定位,并分析細(xì)胞的組蛋白H3第36位賴(lài)氨酸（histone H3 lysine36, H3K36）甲基化修飾模式;合成靶向Ash1L基因的siRNA,對(duì)siRNA-1、 siRNA-2、siRNA-3及對(duì)照組進(jìn)行熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡,篩選有效siRNA;采用熒光定量PCR分析干擾Ash1L表達(dá)對(duì)處理組及對(duì)照組中凋亡相關(guān)基因及多梳抑制復(fù)合體（polycomb repressive complex 2, PRC2）組成基因的表達(dá)水平的影響。結(jié)果顯示,ASH1L甲基轉(zhuǎn)移酶位于牛卵丘細(xì)胞的細(xì)胞核中,呈點(diǎn)狀分布。成功篩選到能有效干擾牛Ash1L基因的siRNA-2,其干擾效率為60%～70%。將siRNA-2轉(zhuǎn)染卵丘細(xì)胞后,該干擾組細(xì)胞中H3K36的單甲基化、二甲基化及三甲基化3種甲基化水平均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）;干擾Ash1L導(dǎo)致凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 牛卵母細(xì)胞的體外成熟
    1.3 牛卵丘細(xì)胞培養(yǎng)
    1.4 Ash1L siRNAs的設(shè)計(jì)與合成
    1.5 牛體外受精(in vitro fertilization,IVF)胚胎的制備和胚胎注射
    1.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    1.8 免疫熒光染色
    1.9 蛋白質(zhì)免疫印跡
    1.10 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié) 果
    2.1 牛卵丘細(xì)胞的培養(yǎng)
    2.2 Ash1L基因及其蛋白在卵丘細(xì)胞中的表達(dá)
    2.3 牛卵丘細(xì)胞中H3K36甲基化修飾狀態(tài)
    2.4 牛Ash1L基因有效siRNA序列的篩選及干擾效率檢測(cè)
    2.5 干擾Ash1L基因?qū)β亚鸺?xì)胞中H3K36甲基化狀態(tài)的影響
    2.6 干擾Ash1L基因?qū)Φ蛲鱿嚓P(guān)基因及PRC2蛋白基因表達(dá)的影響
3 討 論
4 結(jié) 論


【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]Wnt/β-catenin協(xié)同褪黑素、PI3K信號(hào)通路對(duì)豬卵巢顆粒細(xì)胞發(fā)育的影響[D]. 楊有福.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3707387