口蹄疫（Foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）感染所引起的一種急性、熱性、高度接觸傳染性疫病,主要感染豬、牛、羊等偶蹄動物。該病傳播途徑多、傳播速度快,曾在世界范圍內造成巨大經濟損失,被世界動物衛(wèi)生組織列為法定報告的動物疫病。目前對于該病的防控主要以疫苗免疫預防為主,而且傳統(tǒng)滅活疫苗仍占據主導地位。然而,傳統(tǒng)疫苗在許多方面仍亟待改進,如存在安全風險、疫苗研發(fā)周期較長、免疫反應滯后、免疫保護時間較短等,因此研制新型疫苗對于提高免疫效果和快速有效地防控口蹄疫具有重要意義,而深入研究病毒感染機制和宿主免疫機理將為疫苗研發(fā)提供理論基礎。研究表明microRNAs（miRNAs）在病毒與宿主細胞相互作用的過程中發(fā)揮重要的調節(jié)作用,因此,通過操控miRNAs的作用抑制病毒復制是防控病毒病的新型策略。然而,到目前為止,宿主miRNAs在口蹄疫病毒感染過程中的作用及其機理研究很少�；谏鲜霈F狀,我們以近些年我國境內的流行毒株FMDV/O/BY/2010和其天然宿主細胞系PK-15（豬腎細胞系）為主要研究... 

【文章頁數】：51 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 前言
    1.2 口蹄疫
        1.2.1 口蹄疫的流行現狀
        1.2.2 口蹄疫病毒的結構特點及其致病性
        1.2.3 宿主抗口蹄疫病毒感染的免疫機理研究
        1.2.4 口蹄疫的防控現狀
    1.3 miRNAs和RNAi
        1.3.1 miRNAs的特點及研究進展
        1.3.2 RNAi在常見豬病中的研究進展
    1.4 總結與展望
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 質粒、菌株、毒株和細胞系
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗儀器
        2.1.4 常用試劑配置
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 口蹄疫病毒的繁殖
        2.2.3 口蹄疫病毒TCID_(50)的測定
        2.2.4 病毒感染實驗
        2.2.5 芯片雜交及數據分析
        2.2.6 細胞轉染
        2.2.7 miRNAs的提取及定量
        2.2.8 miR-1307過量表達細胞株的構建
        2.2.9 RT-qPCR
        2.2.10 Western blot
        2.2.11 雙熒光素酶報告實驗
        2.2.12 乳鼠攻毒實驗
第三章 實驗結果與分析
    3.1 口蹄疫病毒感染差異調控miRNAs的鑒定
    3.2 口蹄疫病毒感染誘導miR-1307的表達
    3.3 轉染miR-1307的模擬物顯著抑制口蹄疫病毒的復制
    3.4 過量表達miR-1307抑制口蹄疫病毒的復制
    3.5 過量表達miR-1307特異性地降低VP1和VP3的蛋白表達水平
    3.6 miR-1307特異性地降低VP1和VP3的RNA穩(wěn)定性
    3.7 miR-1307可能間接調控VP1和VP3的RNA穩(wěn)定性
    3.8 miR-1307能夠顯著延緩口蹄疫病毒對乳鼠的致死效應
第四章 討論
    4.1 豬源miR-1307抑制口蹄疫病毒的復制
    4.2 miR-1307降低口蹄疫病毒基因組VP1和VP3編碼序列的RNA穩(wěn)定性
    4.3 miR-1307在口蹄疫防控方面有臨床應用前景
第五章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3705727