口蹄疫（Foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）感染所引起的一種急性、熱性、高度接觸傳染性疫病,主要感染豬、牛、羊等偶蹄動物。該病傳播途徑多、傳播速度快,曾在世界范圍內(nèi)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失,被世界動物衛(wèi)生組織列為法定報(bào)告的動物疫病。目前對于該病的防控主要以疫苗免疫預(yù)防為主,而且傳統(tǒng)滅活疫苗仍占據(jù)主導(dǎo)地位。然而,傳統(tǒng)疫苗在許多方面仍亟待改進(jìn),如存在安全風(fēng)險(xiǎn)、疫苗研發(fā)周期較長、免疫反應(yīng)滯后、免疫保護(hù)時間較短等,因此研制新型疫苗對于提高免疫效果和快速有效地防控口蹄疫具有重要意義,而深入研究病毒感染機(jī)制和宿主免疫機(jī)理將為疫苗研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。研究表明microRNAs（miRNAs）在病毒與宿主細(xì)胞相互作用的過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用,因此,通過操控miRNAs的作用抑制病毒復(fù)制是防控病毒病的新型策略。然而,到目前為止,宿主miRNAs在口蹄疫病毒感染過程中的作用及其機(jī)理研究很少。基于上述現(xiàn)狀,我們以近些年我國境內(nèi)的流行毒株FMDV/O/BY/2010和其天然宿主細(xì)胞系PK-15（豬腎細(xì)胞系）為主要研究... 

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 前言
    1.2 口蹄疫
        1.2.1 口蹄疫的流行現(xiàn)狀
        1.2.2 口蹄疫病毒的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及其致病性
        1.2.3 宿主抗口蹄疫病毒感染的免疫機(jī)理研究
        1.2.4 口蹄疫的防控現(xiàn)狀
    1.3 miRNAs和RNAi
        1.3.1 miRNAs的特點(diǎn)及研究進(jìn)展
        1.3.2 RNAi在常見豬病中的研究進(jìn)展
    1.4 總結(jié)與展望
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 質(zhì)粒、菌株、毒株和細(xì)胞系
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 常用試劑配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 口蹄疫病毒的繁殖
        2.2.3 口蹄疫病毒TCID_(50)的測定
        2.2.4 病毒感染實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 芯片雜交及數(shù)據(jù)分析
        2.2.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.7 miRNAs的提取及定量
        2.2.8 miR-1307過量表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建
        2.2.9 RT-qPCR
        2.2.10 Western blot
        2.2.11 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
        2.2.12 乳鼠攻毒實(shí)驗(yàn)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 口蹄疫病毒感染差異調(diào)控miRNAs的鑒定
    3.2 口蹄疫病毒感染誘導(dǎo)miR-1307的表達(dá)
    3.3 轉(zhuǎn)染miR-1307的模擬物顯著抑制口蹄疫病毒的復(fù)制
    3.4 過量表達(dá)miR-1307抑制口蹄疫病毒的復(fù)制
    3.5 過量表達(dá)miR-1307特異性地降低VP1和VP3的蛋白表達(dá)水平
    3.6 miR-1307特異性地降低VP1和VP3的RNA穩(wěn)定性
    3.7 miR-1307可能間接調(diào)控VP1和VP3的RNA穩(wěn)定性
    3.8 miR-1307能夠顯著延緩口蹄疫病毒對乳鼠的致死效應(yīng)
第四章 討論
    4.1 豬源miR-1307抑制口蹄疫病毒的復(fù)制
    4.2 miR-1307降低口蹄疫病毒基因組VP1和VP3編碼序列的RNA穩(wěn)定性
    4.3 miR-1307在口蹄疫防控方面有臨床應(yīng)用前景
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3705727