口蹄疫是引起偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、接觸性傳染病。防控FMD主要技術(shù)手段是疫苗免疫,由于FMDV自然屬性限制,導(dǎo)致部分疫苗毒株生產(chǎn)性能不高,免疫效力低下。為解決疫苗生產(chǎn)中生產(chǎn)滴度較低、病變時(shí)間不穩(wěn)定的問(wèn)題,本實(shí)驗(yàn)室利用反向遺傳技術(shù)獲得了嵌合毒株rA-WT （Zheng, Guo et al.2013）。該嵌合毒株解決了這一難題,提高了疫苗生產(chǎn)滴度、產(chǎn)量和免疫效力。但該毒株生產(chǎn)種毒為強(qiáng)毒,存在生物安全隱患。本研究是在rA-WT嵌合毒株L的SAP區(qū)域進(jìn)行突變,消除或降低天然免疫抑制功能,致使其對(duì)豬和牛能夠迅速誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,而不能發(fā)病,提高其作為疫苗毒株的生物安全性。 在實(shí)驗(yàn)室已有A型FMDV重組質(zhì)粒（命名為prA-WT）基礎(chǔ)上,利用口蹄疫病毒反向遺傳操作技術(shù),通過(guò)定點(diǎn)突變,構(gòu)建口蹄疫病毒SAP區(qū)域突變的A型口蹄疫病毒重組質(zhì)粒（命名為prA-mSAP）。將構(gòu)建重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞能致細(xì)胞病變（CPE）。連續(xù)傳代后,經(jīng)RT-PCR、間接免疫熒光等試驗(yàn)鑒定,結(jié)果證實(shí),成功拯救了SAP突變的重組病毒（命名為rA-mSAP）。另外,比較測(cè)定了該重組毒與親本毒（rA-WT）對(duì)BHK21細(xì)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1.1 口蹄疫概述
    1.2 我國(guó)A型FMD流行及變異
    1.3 種毒篩選及疫苗研制
    1.4 FMD疫苗改善方法
    1.5 研究目的及意義
第二章 口蹄疫病毒A型SAP突變毒株構(gòu)建、鑒定及生物學(xué)特性檢測(cè)
    摘要
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 質(zhì)粒和細(xì)胞系
        2.1.2 載體與主要試劑
        2.1.3 試驗(yàn)所用溶液及其配制
        2.1.4 試驗(yàn)器材
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.2.2 L基因SAP區(qū)域突變
        2.2.3 含有SAP突變的重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.4 重組病毒的拯救
        2.2.5 拯救病毒的鑒定
        2.2.6 生物學(xué)特性測(cè)定
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 重組質(zhì)粒PCD-OL的鑒定
        2.3.2 含有SAP突變質(zhì)粒的鑒定
        2.3.3 重組病毒的拯救
        2.3.4 拯救病毒的鑒定
        2.3.5 拯救病毒的生物學(xué)特性
    2.4 討論
第三章 RA-WT和RA-MSAP對(duì)豬致病性差異分析
    摘要
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 毒株和試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 試驗(yàn)試劑
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 攻毒方案
        3.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)血毒癥和鼻試子核酸含量
        3.2.3 血清抗體水平檢測(cè)
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 攻毒后體溫測(cè)定以及臨床癥狀記錄結(jié)果
        3.3.2 血毒癥和鼻試子核酸測(cè)定結(jié)果
        3.3.3 攻毒后抗體水平結(jié)果
    3.4 討論
第四章 RA-WT和RA-MSAP免疫應(yīng)答差異分析
    摘要
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 毒株和佐劑
        4.1.2 抗體及試劑盒
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 抗原量的確定以及滅活疫苗制備
        4.2.2 A型口蹄疫陰性豬的篩選
        4.2.3 免疫方案
        4.2.4 免疫后淋巴細(xì)胞亞群分化測(cè)定
        4.2.5 攻毒試驗(yàn)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 RA-MSAP毒株與RA-WT毒株肌肉注射豬血清抗體水平檢測(cè)結(jié)果
        4.3.2 RA-MSAP滅活疫苗和RA-WT滅活疫苗免疫豬的血清抗體水平檢測(cè)結(jié)果
        4.3.3 RA-MSAP毒株與RA-WT毒株肌肉注射豬外周血淋巴細(xì)胞亞群分布
        4.3.4 RA-MSAP滅活疫苗和RA-WT滅活疫苗免疫豬外周血淋巴細(xì)胞亞群分布
        4.3.5 RA-MSAP毒株和RA-WT毒株肌肉注射后攻毒試驗(yàn)結(jié)果
        4.3.6 RA-MSAP滅活疫苗和RA-WT滅活疫苗免疫后攻毒試驗(yàn)結(jié)果
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]以AdMax載體系統(tǒng)構(gòu)建和制備腎癌相關(guān)抗原G250基因重組腺病毒表達(dá)載體[J]. 齊桓.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2008(09)



本文編號(hào)：3703490