產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（ETEC）是引起新生仔豬腹瀉的主要病原。本研究從江蘇和江西兩省部分地區(qū)的規(guī)�；i場(chǎng)發(fā)生腹瀉的新生仔豬中分離得到攜帶菌毛基因的大腸桿菌并對(duì)菌毛基因型的分布特征進(jìn)行了分析。利用基因工程技術(shù)在大腸桿菌中分別表達(dá)了F4、F5、F6菌毛亞單位基因faeG、fanC、fas A并驗(yàn)證了重組菌毛蛋白的免疫原性。以純化的重組F4菌毛蛋白作為檢測(cè)抗原建立了間接ELISA方法,并初步應(yīng)用于臨床檢測(cè)。本文研究內(nèi)容如下：1仔豬腸致病性大腸桿菌的分離和鑒定2012年10月至2013年9月間,從江蘇、江西2省部分地區(qū)的13家豬場(chǎng)采集臨床疑似新生仔豬腹瀉糞樣146份,從中分離、鑒定出116株大腸桿菌。根據(jù)GenBank發(fā)表的大腸桿菌F4、F5、F6菌毛的基因序列分別設(shè)計(jì)特異性引物,對(duì)116株致仔豬腹瀉大腸桿菌的菌毛基因進(jìn)行PCR檢測(cè)。結(jié)果有20株（17%）大腸桿菌檢測(cè)出F4菌毛基因,6株（5.2%）檢測(cè)出F5菌毛基因,19株（16%）檢測(cè)出F6菌毛基因,有5株（4.3%）大腸桿菌同時(shí)檢測(cè)出2種菌毛基因。通過溶血性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),有13株（10%）大腸桿菌完全溶血,6株（5.2%）不完全溶血。通過分析菌毛... 

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 仔豬黃白痢的研究進(jìn)展
        1 仔豬黃白痢的病原學(xué)
        2 仔豬黃白痢的發(fā)病特征
        3 仔豬黃白痢的流行情況
        參考文獻(xiàn)
    第二章 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌毛的研究進(jìn)展
        1 菌毛的主要類型
            1.1 F4菌毛
            1.2 F5菌毛
            1.3 F6菌毛
        2 菌毛的生化特性
        3 菌毛的表達(dá)條件
        4 菌毛的流行病學(xué)分布
        參考文獻(xiàn)
    第三章 仔豬黃白痢的防治
        1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理
        2 微生態(tài)制劑治療
        3 抗生素治療
        4 疫苗預(yù)防
            4.1 全菌滅活疫苗
            4.2 亞單位疫苗
            4.3 基因工程疫苗
            4.4 ETEC疫苗的展望
        參考文獻(xiàn)
第二部分 試驗(yàn)研究
    第四章 仔豬腸致病性大腸桿菌的分離和鑒定
        1 材料與方法
            1.1 病料樣本采集
            1.2 培養(yǎng)基
            1.3 其他試劑
            1.4 參考菌株
            1.5 PCR引物
            1.6 細(xì)菌的分離與純培養(yǎng)
            1.7 革蘭氏染色鏡檢
            1.8 生化試驗(yàn)
            1.9 PCR模板的制備
            1.10 PCR檢測(cè)菌毛基因
        2 結(jié)果
            2.1 細(xì)菌分離和生化鑒定
            2.2 分離菌株的菌毛基因檢測(cè)
            2.3 分離菌株的溶血性與菌毛類型的相關(guān)性
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第五章 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌F4、F5和F6菌毛亞單位基因的克隆表達(dá)
        1 材料與方法
            1.1 菌株和質(zhì)粒載體
            1.2 主要試劑
            1.3 目的基因的擴(kuò)增
            1.4 PCR產(chǎn)物的克隆與轉(zhuǎn)化
            1.5 目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及SDS-PAGE檢測(cè)
            1.6 重組蛋白表達(dá)形式的鑒定
            1.7 重組蛋白的純化與復(fù)性
            1.8 純化產(chǎn)物的Western-blot分析
        2 結(jié)果
            2.1 faeG、fanC及fasA的PCR擴(kuò)增
            2.2 重組原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.3 faeG、fanC、fasA基因在大腸桿菌BL21(DE3)中的誘導(dǎo)表達(dá)
            2.4 重組蛋白的純化與復(fù)性
            2.5 重組蛋白表達(dá)Western-blot鑒定
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第六章 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌F4菌毛抗體間接ELISA檢測(cè)方法的建立及作用
        1 材料與方法
            1.1 血清及生化試劑
            1.2 免疫血清的制備
            1.3 間接ELISA方法條件的優(yōu)化
            1.4 間接ELISA方法臨界值的確定
            1.5 阻斷試驗(yàn)
            1.6 特異性試驗(yàn)
            1.7 重復(fù)性試驗(yàn)
            1.8 符合性試驗(yàn)
            1.9 臨床樣品檢測(cè)
        2 結(jié)果
            2.1 抗原包被濃度和血清最佳稀釋倍數(shù)的確定
            2.2 血清最佳作用時(shí)間的確定
            2.3 封閉液的確定
            2.4 酶標(biāo)二抗工作濃度和時(shí)間的確定
            2.5 間接ELISA方法臨界值的確定
            2.6 阻斷試驗(yàn)
            2.7 特異性試驗(yàn)
            2.8 重復(fù)性試驗(yàn)
            2.9 符合性試驗(yàn)
            2.10 臨床豬血清檢測(cè)
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
附錄主要溶液及其配制方法
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]hp1188基因的克隆表達(dá)及免疫特性研究[D]. 韓飛.重慶醫(yī)科大學(xué) 2009
[3]我國部分地區(qū)致新生仔豬腹瀉大腸桿菌的生物學(xué)特性[D]. 苗曉青.揚(yáng)州大學(xué) 2007
[4]幽門螺桿菌重組VacA-CtxB蛋白的原核表達(dá)及免疫原性研究[D]. 張任飛.重慶醫(yī)科大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3700028