硒是動物體生命活動中所必需的微量元素，對動物體正常生理功能的發(fā)揮起著重要作用。硒與人和動物的健康密切相關(guān)，硒缺乏能夠引起人的地方病——克山病，及牲畜的白肌病等，硒對免疫系統(tǒng)功能的正常發(fā)揮也是至關(guān)重要的。硒在動物體內(nèi)主要是以硒蛋白的形式存在，并且主要通過硒蛋白來發(fā)揮其在有機(jī)體內(nèi)的生物學(xué)作用。硒蛋白W（Selenoprotein W，SelW）是一種小的硒蛋白，在硒添加動物的各種組織中均有發(fā)現(xiàn)，在哺乳動物的肌肉、脾臟和腦組織中水平最高。動物體內(nèi)的硒水平和硒攝入量在一定程度調(diào)控硒蛋白的表達(dá)。目前關(guān)于SelW的研究主要集中在哺乳動物，雞缺硒時免疫功能降低，免疫器官發(fā)生變性壞死，但SelW在禽類免疫功能中的作用還是未知的。本試驗(yàn)通過復(fù)制不同硒水平雞模型及建立體外培養(yǎng)雞淋巴細(xì)胞硒蛋白W敲低模型的基礎(chǔ)上，應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR法、TUNEL法等，檢測了雞免疫器官脾臟、胸腺、法氏囊和體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞中SelW、iNOS、COX-2、NF-κB、PTGE、BCl-2、Capase-3、Bax、P53、Bak-1、IL-1R、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12β、IL-17、... 

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【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 硒與硒蛋白
    1.2 硒對動物免疫功能的影響
        1.2.1 硒對動物細(xì)胞免疫功能的影響
        1.2.2 硒對動物體液免疫功能的影響
        1.2.3 硒對動物非特異性免疫功能的影響
    1.3 硒蛋白 W
        1.3.1 SelW 的生物學(xué)特性
        1.3.2 硒對 SelW 的調(diào)控
        1.3.3 SelW 的功能
    1.4 RNA 干擾
        1.4.1 RNAi 的抑制機(jī)理
        1.4.2 RNAi 技術(shù)的功能
        1.4.3 RNAi 的影響因素
    1.5 實(shí)驗(yàn)的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 主要儀器和試劑
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要化學(xué)與生物試劑
        2.1.3 主要試劑的配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組
        2.2.2 組織樣品的采集與處理
        2.2.3 雞脾臟淋巴細(xì)胞的制備
        2.2.4 不同硒濃度對雞脾臟淋巴細(xì)胞的處理
        2.2.5 硒及過氧化氫對雞脾臟淋巴細(xì)胞的處理
        2.2.6 qPCR 對目的基因 mRNA 水平檢測方法的建立
        2.2.7 SelW RNAi 條件的優(yōu)化
        2.2.8 雞脾臟淋巴細(xì)胞 SelW RNAi 試驗(yàn)
        2.2.9 試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析與統(tǒng)計
3 結(jié)果與分析
    3.1 硒對脾臟、胸腺、法氏囊細(xì)胞凋亡的 TUNEL 檢測結(jié)果
    3.2 淋巴細(xì)胞過氧化氫 LD50的測定和形態(tài)學(xué)觀察
    3.3 不同濃度 Se 和 H2O2對淋巴細(xì)胞相對存活率影響的測定
    3.4 不同濃度 Se 和 H2O2處理淋巴細(xì)胞的 AO/EB 雙染檢測結(jié)果
    3.5 目的基因?qū)崟r PCR 檢測方法的建立
    3.6 不同日齡雞脾臟、胸腺、法氏囊 SelW、相關(guān)炎癥基因、凋亡基因和細(xì)胞因子mRNA 表達(dá)水平影響的檢測結(jié)果
        3.6.1 不同日齡雞脾臟、胸腺、法氏囊 SelW mRNA 表達(dá)水平影響的檢測結(jié)果
        3.6.2 不同日齡雞脾臟、胸腺、法氏囊 iNOS、COX-2、NF-κB 及 PTGE mRNA 表達(dá)水平影響的檢測結(jié)果
        3.6.3 不同日齡雞脾臟、胸腺、法氏囊 Bcl-2、Capase-3、Bak-1、Bax 及 P53 mRNA表達(dá)水平影響的檢測結(jié)果
        3.6.4 不同日齡雞脾臟、胸腺、法氏囊 IL-1R、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12β、IL-17、INF-γ和 TNF-α mRNA 表達(dá)水平影響的檢測結(jié)果
    3.7 雞脾臟淋巴細(xì)胞 SelW、相關(guān)炎癥基因、凋亡基因和細(xì)胞因子 mRNA 表達(dá)水平影響的檢測結(jié)果
        3.7.1 雞脾臟淋巴細(xì)胞 SelW mRNA 表達(dá)影響的檢測結(jié)果
        3.7.2 雞脾臟淋巴細(xì)胞 iNOS、NF-κB、PTGE 及 COX-2 mRNA 表達(dá)影響的檢測結(jié)果
        3.7.3 雞脾臟淋巴細(xì)胞 BCl-2、Capase-3、Bak-1、Bax 及 P53、表達(dá)影響的檢測結(jié)果
        3.7.4 雞脾臟淋巴細(xì)胞 IL-1R、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12β、IL-17、INF-γ和 TNF-α mRNA 表達(dá)影響的檢測結(jié)果
    3.8 SelW RNAi 條件的建立和試驗(yàn)結(jié)果
        3.8.1 S-RNA 的轉(zhuǎn)染效率
        3.8.2 SelW RNAi 后淋巴細(xì)胞 AO/EB 雙染檢測結(jié)果
        3.8.3 SelW RNAi 后 SelW 基因 mRNA 表達(dá)水平的檢測結(jié)果
        3.8.4 SelW RNAi 后相關(guān)炎癥基因 iNOS、COX-2、NF-κB 和 PTGE mRNA 表達(dá)水平的檢測結(jié)果
        3.8.5 SelW RNAi 后相關(guān)凋亡基因 BCl-2、Capase-3、Bak-1、Bax 及 P53 mRNA 表達(dá)水平的檢測結(jié)果
        3.8.6 SelW RNAi 后相關(guān)細(xì)胞因子 IL-1R、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12β、IL-17、INF-γ和 TNF-α mRNA 表達(dá)水平的檢測結(jié)果
4 討論
    4.1 硒對雞脾臟、胸腺、法氏囊及脾臟淋巴細(xì)胞 SelW 表達(dá)的影響
    4.2 體外培養(yǎng)脾臟細(xì)胞 SelW 敲低模型的建立
    4.3 SelW 對脾臟、胸腺、法氏囊及淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子 IL-1R、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL -10、IL-12β、IL-17、INF-γ和 TNF-α表達(dá)的影響
    4.4 SelW 對雞脾臟、胸腺和法氏囊及淋巴細(xì)胞 iNOS、COX-2、NF-κB 和 PTGE 表達(dá)的影響
    4.5 SelW 對脾臟、胸腺、法氏囊及淋巴細(xì)胞細(xì)胞凋亡的影響
    4.6 SelW 對脾臟、胸腺、法氏囊及淋巴細(xì)胞 BCl-2、Capase-3、Bak-1、Bax 和 P53 表達(dá)的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄：試驗(yàn)結(jié)果附圖
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]硒對砷誘導(dǎo)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)型一氧化氮合酶和內(nèi)皮型一氧化氮合酶表達(dá)的影響[J]. 姜迎,藺新英,邊建朝,姜艷艷,趙莎莎.  環(huán)境與健康雜志. 2012(03)
[2]硒對鎘轉(zhuǎn)化人支氣管上皮細(xì)胞系16HBE凋亡和癌基因表達(dá)的影響[J]. 余日安,陳華潔,賀凌飛,陳秉,戴文濤,陳學(xué)敏.  華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2012(01)
[3]T-2毒素中毒對低硒大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響[J]. 楊浩杰,王治倫,陳靜宏,宋代琴,薛森海,周曉榮,陳群,譚希旺,楊占田,馬天有.  西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2011(03)
[4]兩種常用轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染siRNA至HL-60細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較[J]. 王巍,張曉希,劉新光.  重慶醫(yī)學(xué). 2011(04)
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博士論文
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[2]小鼠骨骼肌細(xì)胞SelW基因的RNA干擾研究[D]. 王曉龍.東北林業(yè)大學(xué) 2006
[3]RNAi技術(shù)在抑制HBV復(fù)制和表達(dá)中的應(yīng)用[D]. 張宏斌.第一軍醫(yī)大學(xué) 2006
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碩士論文
[1]雞SelW過表達(dá)CHO-K1細(xì)胞系的構(gòu)建及其抗氧化功能的研究[D]. 韓艷輝.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
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本文編號：3699747