豬卵母細(xì)胞的體外成熟及早期胚胎的體外培養(yǎng)技術(shù)是開展家畜胚胎發(fā)育研究和胚胎工程操作的重要內(nèi)容。但是與體內(nèi)獲取的卵母細(xì)胞和胚胎相比,體外獲得的卵母細(xì)胞與胚胎發(fā)育質(zhì)量差是目前遇到的一大問題,因?yàn)樵诼涯讣?xì)胞體外成熟及胚胎體外培養(yǎng)過程中容易受到自由基等多種其它因素的影響。亞細(xì)亞酸是一種從積雪草中分離出來的五環(huán)三萜烯,它的主要功能基團(tuán)包括三個(gè)羥基,一個(gè)不飽和鍵以及一個(gè)羧基。有研究表明,亞細(xì)亞酸具有多種藥理活性,包括抗凋亡、抗衰老、抗炎癥、抗氧化等。但是亞細(xì)亞酸對卵母細(xì)胞體外成熟及早期胚胎體外發(fā)育的影響還未有報(bào)道,因此本研究旨在探究亞細(xì)亞酸對豬卵母細(xì)胞體外成熟及早期胚胎體外培養(yǎng)的影響及其可能的作用機(jī)制。具體內(nèi)容如下:實(shí)驗(yàn)一:在豬卵母細(xì)胞體外成熟過程中補(bǔ)充亞細(xì)亞酸,研究其對卵母細(xì)胞體外成熟的影響。從卵巢中采集GV期的卵母細(xì)胞,進(jìn)行42-44h的成熟培養(yǎng)后,統(tǒng)計(jì)MⅡ期卵母細(xì)胞的成熟率,結(jié)果顯示,補(bǔ)充亞細(xì)亞酸組的卵母細(xì)胞的成熟率與對照組相比有小幅度提升但無顯著差異。將卵母細(xì)胞進(jìn)行PA及IVF處理后,發(fā)現(xiàn)在體外成熟期間補(bǔ)充亞細(xì)亞酸可顯著提高早期胚胎的發(fā)育能力,且囊胚的質(zhì)量也有顯著提高。同時(shí)對卵母細(xì)胞的抗氧化... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
前言
文獻(xiàn)綜述
    第一章 卵母細(xì)胞及早期胚胎氧化應(yīng)激的研究進(jìn)展
        1.1 氧化應(yīng)激
        1.2 氧化應(yīng)激對卵母細(xì)胞質(zhì)量的影響
        1.3 氧化應(yīng)激對早期胚胎發(fā)育的影響
    第二章 亞細(xì)亞酸的研究進(jìn)展
        2.1 亞細(xì)亞酸的藥理特性
        2.2 亞細(xì)亞酸藥物應(yīng)用研究
        2.3 亞細(xì)亞酸對氧化應(yīng)激的緩解作用
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 亞細(xì)亞酸對豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 卵母細(xì)胞來源
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.1.4 實(shí)驗(yàn)用液制備
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 卵母細(xì)胞的收集及成熟培養(yǎng)
            1.2.2 卵母細(xì)胞的藥物處理
            1.2.3 卵母細(xì)胞的孤雌激活
            1.2.4 早期胚胎的培養(yǎng)
            1.2.5 體外受精
            1.2.6 卵母細(xì)胞ROS、GSH染色
            1.2.7 β-半乳糖苷酶染色
            1.2.8 卵丘顆粒細(xì)胞的收集
            1.2.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測卵丘顆粒細(xì)胞ROS和 GSH水平
            1.2.10 流式細(xì)胞術(shù)檢測卵丘顆粒細(xì)胞凋亡情況
            1.2.11 Hoechst33342 染色
            1.2.12 卵母細(xì)胞JC-1 染色
            1.2.13 統(tǒng)計(jì)分析
        1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            1.3.1 亞細(xì)亞酸對卵母細(xì)胞成熟率的影響
            1.3.2 亞細(xì)亞酸對孤雌激活早期胚胎發(fā)育率的影響
            1.3.3 亞細(xì)亞酸對體外受精胚胎發(fā)育的影響
            1.3.4 亞細(xì)亞酸對卵母細(xì)胞抗氧化能力的影響
            1.3.5 亞細(xì)亞酸對卵母細(xì)胞線粒體的影響
            1.3.6 亞細(xì)亞酸對卵母細(xì)胞衰老的影響
            1.3.7 亞細(xì)亞酸對卵丘細(xì)胞的影響
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第二章 亞細(xì)亞酸對豬早期胚胎體外發(fā)育的影響
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 卵母細(xì)胞及豬成纖維細(xì)胞來源
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)用液制備
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 卵母細(xì)胞的收集及成熟培養(yǎng)
            2.2.2 成纖維細(xì)胞分離
            2.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.4 體細(xì)胞核移植
            2.2.5 體外受精
            2.2.6 早期胚胎培養(yǎng)
            2.2.7 早期胚胎ROS、GSH水平的檢測
            2.2.8 早期胚胎的JC-1 染色
            2.2.9 Hoechst33342 染色
            2.2.10 RNA提取
            2.2.11 RNA的反轉(zhuǎn)錄
            2.2.12 實(shí)時(shí)光定量PCR
        2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.3.1 亞細(xì)亞酸對孤雌胚胎發(fā)育率的影響
            2.3.2 亞細(xì)亞酸對孤雌胚胎囊胚質(zhì)量的影響
            2.3.3 亞細(xì)亞酸對孤雌胚胎細(xì)胞內(nèi)抗氧化能力的影響
            2.3.4 亞細(xì)亞酸對孤雌胚胎線粒體的影響
            2.3.5 亞細(xì)亞酸對核移植胚胎發(fā)育率及質(zhì)量的影響
            2.3.6 亞細(xì)亞酸對核移植胚胎基因調(diào)控的影響
            2.3.7 亞細(xì)亞酸對體外受精胚胎發(fā)育率及質(zhì)量的影響
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師簡介
作者簡介及在學(xué)期間所取得的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]體外胚胎培養(yǎng)是胚胎工程技術(shù)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[J]. 李楠,林忠.  中國組織工程研究. 2019(29)
[2]氧化應(yīng)激對生殖健康的影響[J]. 馬文倩,霍正浩,劉春蓮.  寧夏醫(yī)學(xué)雜志. 2019(04)
[3]豬胚胎發(fā)育與胚胎工程研究進(jìn)展[J]. 郭詩萌,劉世超,劉忠華.  中國畜牧雜志. 2017(09)
[4]Asiatic acid inhibits lung cancer cell growth in vitro and in vivo by destroying mitochondria[J]. Tiancong Wu,Ji Geng,Wenjie Guo,Jing Gao,Xixu Zhu.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2017(01)
[5]氧化還原信號(hào)和氧化應(yīng)激/還原應(yīng)激[J]. 周宗燦.  毒理學(xué)雜志. 2015(01)

碩士論文
[1]AAPH誘導(dǎo)小鼠早期胚胎氧化應(yīng)激的分子機(jī)制及谷胱甘肽抗氧化作用的研究[D]. 劉雅賢.內(nèi)蒙古大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3697513