背景:剛地弓形蟲簡稱弓形蟲（Toxoplasma gondii,T.gondii）,是一種只寄生在有細(xì)胞核的細(xì)胞內(nèi),在世界各地均有發(fā)現(xiàn)的人獸共患寄生原蟲。弓形蟲能夠感染幾乎所有的恒溫脊椎動物,包括人在內(nèi),人和動物被感染后可引起弓形蟲病。該病不僅給畜牧業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,也給人類健康帶來潛在的威脅。目前尚無特效疫苗和藥物來預(yù)防或治療該病。目的:本課題通過對弓形蟲與唾液酸受體結(jié)合的全蛋白質(zhì)組的初步分析,選取唾液酸結(jié)合蛋白質(zhì)假定TCP-1進(jìn)行后續(xù)研究。關(guān)于弓形蟲假定TCP-1蛋白質(zhì)的研究目前尚未見有任何報道。本研究對其是否與唾液酸結(jié)合進(jìn)行了體外驗證,從而探究弓形蟲依賴唾液酸途徑侵入宿主細(xì)胞的機理,為研制新的抗弓形蟲藥物提供新的方向。方法:純化弓形蟲RH株速殖子,Biozol法提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA后進(jìn)行PCR擴增�；厥漳康钠�,回收產(chǎn)物克隆至T載體中,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài),提取質(zhì)粒測序,測得的序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。構(gòu)建原核表達(dá)載體表達(dá)蛋白質(zhì),利用親和層析法純化重組蛋白質(zhì),SDS-PAGE和Western-blot驗證純化的重組蛋白質(zhì)。HIS-TCP-1蛋白質(zhì)與弗氏佐劑乳化,免疫S... 

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 弓形蟲生活特性
        1.1.1 病原
        1.1.2 形態(tài)學(xué)
        1.1.3 生活史
    1.2 弓形蟲入侵機制
        1.2.1 入侵過程
        1.2.2 入侵過程相關(guān)蛋白質(zhì)
        1.2.3 宿主表面相關(guān)受體
    1.3 分子伴侶
        1.3.1 分子伴侶分類及功能
        1.3.2 TCP-1與各種疾病相關(guān)
        1.3.3 TCP-1與寄生蟲病相關(guān)
    1.4 本研究的目的及意義
第二章 假定TCP-1蛋白質(zhì)基因的克隆與生物信息學(xué)分析
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 結(jié)果及分析
        2.3.1 弓形蟲(RH株)總RNA提取
        2.3.2 TGME49_318410基因全長擴增
        2.3.3 生物信息學(xué)分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 假定TCP-1蛋白質(zhì)原核表達(dá)載體構(gòu)建、表達(dá)、純化及多克隆抗體的制備
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 結(jié)果及分析
        3.3.1 重組質(zhì)粒雙酶切驗證
        3.3.2 重組蛋白質(zhì)的小量表達(dá)
        3.3.3 兩種標(biāo)簽重組蛋白質(zhì)的純化與驗證
        3.3.4 血清抗體效價檢測及IgG純化
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 假定TCP-1蛋白質(zhì)在弓形蟲蟲體亞細(xì)胞定位
    4.1 前言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
    4.3 結(jié)果及分析
        4.3.1 弓形蟲全蟲蛋白驗證
        4.3.2 RH株速殖子假定TCP-1蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 假定TCP-1蛋白質(zhì)與唾液酸入侵途徑相關(guān)功能分析
    5.1 前言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 材料
        5.2.2 方法
    5.3 結(jié)果及分析
        5.3.1 假定TCP-1蛋白質(zhì)與唾液酸結(jié)合實驗
        5.3.2 GST-TCP-1蛋白質(zhì)與細(xì)胞黏附實驗
        5.3.3 抗體IgG抑蟲結(jié)果
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]檢測犬弓形蟲SAG3抗體間接ELISA方法的建立[J]. 宋慧琦,楊升,高珺珊,宮鵬濤,李建華,張西臣.  中國病原生物學(xué)雜志. 2016(04)
[2]福建貓及兔體內(nèi)弓形體的發(fā)現(xiàn)[J]. 于恩庶,陳黛西,林師敬.  微生物學(xué)報. 1957(01)

博士論文
[1]瘧原蟲TatD-like DNase的功能分析及與蟲體致病性的相關(guān)性分析[D]. 常志廣.吉林大學(xué) 2016
[2]底物激酶調(diào)控?zé)嵝菘说鞍?0α分子伴侶功能的機理研究[D]. 魯薪安.清華大學(xué) 2015



本文編號：3697163