布氏田鼠（Lasiopodomys brandtii）是我國北方典型草原上的有害鼠種，具有季節(jié)性繁殖的特點。Stra8（stimulated by retinoic acid）基因是減數(shù)分裂起始的標志基因，在布氏田鼠睪丸組織中特異表達，而且呈現(xiàn)季節(jié)性表達的特征。DNA甲基化是一種重要的表觀遺傳修飾，有研究發(fā)現(xiàn)DNA甲基化可能承載了環(huán)境變化對物種基因組影響的信息。本研究分析了布氏田鼠Stra8基因啟動區(qū)在不同季節(jié)的DNA甲基化特征，從DNA甲基化的角度探索表觀修飾在布氏田鼠Stra8基因季節(jié)性表達調控中的作用。 本研究克隆得到布氏田鼠Stra8基因部分cDNA序列，在此基礎上通過5’-RACE獲得了布氏田鼠Stra8基因轉錄起始位點；然后通過染色體步移的方法得到該基因轉錄起始位點上游序列。通過分析我們發(fā)現(xiàn)在布氏田鼠Stra8基因轉錄起始位點附近存在多個重要轉錄因子，如SP1、NF1等的結合位點，且存在多個視黃酸受體結合位點。在轉錄起始位點附近還有一個CpG島。我們選取了4月、6月及8月的野外雄性布氏田鼠，對其睪丸組織中Stra8基因轉錄起始位點附近的DNA序列進行甲基化狀態(tài)分析，我... 

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 布氏田鼠的分布和繁殖生物學特征
    1.2 Stra8 簡介
        1.2.1 Stra8 基因
        1.2.2 布氏田鼠 Stra8 基因季節(jié)性表達特征
    1.3 DNA 甲基化——表觀遺傳修飾的主要形式
        1.3.1 表觀遺傳及其主要形式
        1.3.2 DNA 甲基化
    1.4 研究目的與意義
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 分子生物學試劑盒
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 序列分析軟件和網(wǎng)站
        2.1.5 主要儀器設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 布氏田鼠 Stra8 基因 cDNA 序列的克隆
        2.2.2 5’–RACE 克隆布氏田鼠 Stra8 基因轉錄起始位點
        2.2.3 Genome-Walking 克隆布氏田鼠 Stra8 基因啟動區(qū)序列
        2.2.4 重亞硫酸鹽測序（Bisulfite-sequencing）法測定 Stra8 基因啟動區(qū)甲基化程度
第三章 結果與分析
    3.1 Stra8 基因 cDNA 序列的獲得
        3.1.1 提取總 RNA 的質量
        3.1.2 目的片段的獲得
    3.2 Stra8 基因轉錄起始位點的獲得
        3.2.1 提取總 RNA 的質量
        3.2.2 5’-RACE 克隆 Stra8 基因轉錄起始位點
    3.3 Stra8 基因上游序列的獲得
        3.3.1 提取基因組 DNA 的質量
        3.3.2 DNA 步移
    3.4 雄性布氏田鼠 Stra8 基因啟動子、轉錄因子結合位點以及 CpG 島預測
    3.5 Stra8 基因轉錄起始位點上游及附近序列的 DNA 甲基化分析
    3.6 布氏田鼠睪丸組織 Stra8 基因-1952bp 至+137bp 區(qū)域內各 CpG 位點在不同季節(jié)的甲基化百分比的差異顯著性分析
    3.7 布氏田鼠 Stra8 基因啟動區(qū)在 4 月、6 月、8 月之間具有顯著性差異的 CpG 位點的甲基化百分比與 Stra8 基因表達量的相關性分析
第四章 討論
參考文獻
附錄
    附表 1 所獲布氏田鼠 Stra8 基因 cDNA 序列
    附表 2 5’-RACE 確定布氏田鼠 Stra8 基因轉錄起始位點所獲 cDNA 序列
    附表 3 染色體步移布氏田鼠 Stra8 基因所獲上游序列
    附表 4 布氏田鼠 Stra8 基因-1952bp 至+137bp 區(qū)域內不同組織不同季節(jié)的 CpG 位點的甲基化百分比統(tǒng)計
    附表 5 布氏田鼠睪丸組織 Stra8 基因-1952bp 至+137bp 區(qū)域內各 CpG 位點在不同季節(jié)的甲基化百分比的差異差異顯著性分析
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]DNA甲基化與脊椎動物胚胎發(fā)育[J]. 楊曉丹,韓威,劉峰.  遺傳. 2012(09)
[2]DNA甲基化在精子發(fā)生中的作用[J]. 葛少欽,李向陽,李建忠,段斐.  生命的化學. 2012(03)
[3]Effects of fasting and refeeding on expression of MAFbx and MuRF1 in chick skeletal muscle[J]. LI QingHe 1,LI JinXiu 1,LAN He 1,WANG Nan 2,HU XiaoXiang 1,CHEN Li 3 ＆ LI Ning 1 1 State Key Laboratory for Agrobiotechnology,China Agricultural University,Beijing 100193,China;2 College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing 100193,China;3 Institute of Animal Sciences and Veterinary Medicine,Zhejiang Academy of Agricultural Sciences,Hangzhou 310021,China.  Science China（Life Sciences）. 2011(10)
[4]小鼠精原干細胞體外分化中Stra8、mina53表達的研究[J]. 王寶峰,王菊,謝松松,周宗瑤.  石河子大學學報(自然科學版). 2010(06)
[5]繁殖季節(jié)和非繁殖季節(jié)布氏田鼠種群參數(shù)和生理特點的差異[J]. 王大偉,叢林,王宇,劉曉輝.  生態(tài)學報. 2010(13)
[6]棉鈴蟲細胞色素P450 CYP9A12基因5′-上游區(qū)的克隆及序列分析[J]. 周穎君,楊亦樺,武淑文,吳益東.  昆蟲學報. 2008(02)
[7]錫林郭勒盟阿巴嘎旗布氏田鼠發(fā)生及防治[J]. 于成,薩仁花,羅建平,高宏.  內蒙古草業(yè). 2006(01)
[8]布氏田鼠數(shù)量和空間分布的年際動態(tài)及周期性初步分析[J]. 房繼明，孫儒泳.  動物學雜志. 1994(06)
[9]內蒙古草場鼠害的基本特征及其生態(tài)對策[J]. 鐘文勤,周慶強,孫崇潞.  獸類學報. 1985(04)
[10]布氏田鼠種群繁殖的研究[J]. 張潔,鐘文勤.  動物學報. 1979(03)



本文編號：3687600