維生素D除具備經(jīng)典的鈣磷穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)作用外,還參與到機體免疫和內(nèi)分泌代謝等多種生理功能的調(diào)節(jié)中,對奶牛鈣磷代謝紊亂也有一定的治療作用。STC-1是一種類糖蛋白激素,在哺乳動物的多種組織中都有分布和表達,研究表明其在體內(nèi)可以通過促進磷酸鹽的吸收和重吸收、抑制鈣的吸收來維特鈣磷穩(wěn)態(tài)的平衡。維生素D作為一種類固醇激素,參與到內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)中,如抑制甲狀旁腺素（PTH）的合成與分泌和調(diào)節(jié)降鈣素（CT）的分泌,但是其對反芻動物斯鈣素-1（STC-1）的影響未見文獻報道。此外,維生素D對細胞增殖和凋亡也有一定作用,作為藥物使用時具有一定毒性,因此對其主要作用器官腎臟可能會產(chǎn)生損害。綜上所述,本實驗的目的是研究1,25（OH）2D3對牛腎細胞（MDBK細胞）STC-1表達的影響及其機制,以及1,25（OH）2D3對牛腎細胞增殖凋亡的影響。 本實驗對牛腎細胞（MDBK細胞）進行培養(yǎng),在細胞對數(shù)生長期添加1,25（OH）2D3處理。在探究1,25（OH）2D3對STC-1表達影響中,通過熒光定量PCR檢測在1,25（OH）2D3對牛腎細胞STC-1的表達影響,并添加轉(zhuǎn)錄抑制劑放線菌素D （ActD）... 

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第一部分 文獻綜述
    1 維生素D的研究進展
        1.1 維生素D概述
        1.2 維生素D的來源與吸收
        1.3 維生素D的作用
            1.3.1 維生素D對鈣磷代謝的調(diào)節(jié)作用
            1.3.2 維生素D對免疫系統(tǒng)的作用
            1.3.3 維生素D對細胞增殖分化和凋亡的作用
        1.4 維生素D與疾病
            1.4.1 維生素D與骨骼疾病
            1.4.2 維生素D與腎臟疾病
            1.4.3 維生素D與腫瘤
            1.4.4 維生素D與高血壓
        1.5 維生素D與其它因子
            1.5.1 維生素D與24-羥化酶
            1.5.2 維生素D與甲狀旁腺激素
            1.5.3 維生素D與降鈣素(CT)
            1.5.4 維生素D與胰島素
        1.6 維生素D在動物生產(chǎn)上的研究
            1.6.1 維生素D在奶牛生產(chǎn)上的研究
            1.6.2 維生素D在豬生產(chǎn)上的研究
            1.6.3 維生素D在家禽生產(chǎn)上的研究
    2 STC-1的研究進展
        2.1 STC-1概述
        2.2 STC-1的基因和蛋白結(jié)構(gòu)
        2.3 STC-1的分布和表達
        2.4 STC-1的作用
            2.4.1 STC-1對鈣磷代謝的作用
            2.4.2 STC-1對生殖的作用
            2.4.3 STC-1對腫瘤的作用
第二部分 實驗研究部分
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要試劑及耗材
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 主要溶液及配置
    2 實驗方法
        2.1 MDBK牛腎細胞的培養(yǎng)
            2.1.1 細胞培養(yǎng)
            2.1.2 細胞凍存和復(fù)蘇
        2.2 實驗分組
            2.2.1 探究1,25(OH)_2D_3對STC表達影響的實驗分組
            2.2.2 探究1,25(OH)_2D_3對凋亡影響的實驗分組
        2.3 熒光定量
            2.3.1 引物設(shè)計與合成
            2.3.2 RNA的提取
            2.3.3 反轉(zhuǎn)錄PCR
            2.3.4 熒光定量PCR
        2.4 AO/EB染色檢測凋亡
        2.5 流式細胞儀檢測細胞凋亡
        2.6 數(shù)據(jù)處理結(jié)果
    3 結(jié)果與分析
        3.1 MDBK牛腎細胞培養(yǎng)
        3.2 RNA的提取和RT-PCR
            3.2.1 RNA的提取
            3.2.2 PCR擴增STC-1基因及測序
            3.2.3 熒光定量PCR
        3.3 1,25(OH)_2D_3對STC-1表達的影響
            3.3.1 不同濃度1,25(OH)_2D_3對STC-1表達影響
            3.3.2 1,25(OH)_2D_3作用不同時間對STC-1表達影響
            3.3.3 添加放線菌素D(ActD)及1,25(OH)_2D_3對STC-1表達影響
            3.3.4 添加放線菌銅(CHX)及1,25(OH)_2D_3對STC-1表達影響
        3.4 1,25(OH)_2D_3對牛腎細胞凋亡的影響
            3.4.1 AO/EB染色檢測1,25(OH)_2D_3作用不同時間對細胞凋亡影響
            3.4.2 流式細胞儀檢測1,25(OH)_2D_3作用不同時間對細胞凋亡影響
            3.4.3 流式細胞儀檢測不同濃度1,25(OH)_2D_3對細胞凋亡影響
            3.4.4 1,25(OH)_2D_3作用不同時間對細胞Fas表達影響
            3.4.5 1,25(OH)_2D_3作用不同時間對細胞Bax和Bcl-2表達影響
    4 討論
        4.1 1,25(OH)_2D_3對STC-1表達的影響
            4.1.1 1,25(OH)_2D_3對STC-1表達的上調(diào)作用
            4.1.2 1,25(OH)_2D_3上調(diào)STC-1表達的機制
        4.2 1,25(OH)_2D_3對牛腎細胞凋亡的影響
            4.2.1 1,25(OH)_2D_3對牛腎細胞的促凋亡作用
            4.2.2 1,25(OH)_2D_3在基因水平對細胞凋亡的影響
    5 結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3680861