牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis,M.bovis）是一種革蘭氏陽性胞內(nèi)寄生菌,可通過呼吸道等途徑感染哺乳動物引起牛結(jié)核病。隨著HIV和分枝桿菌并發(fā)性感染及耐藥性菌株不斷的出現(xiàn),針對耐藥性結(jié)核病的診療變得越來越困難。因此,分枝桿菌致病分子機制的基礎(chǔ)研究對診斷和治療結(jié)核病顯得尤為重要。已有研究證實在牛分枝桿菌感染宿主細(xì)胞過程中,PE/PPE家族成員發(fā)揮了重要作用,被認(rèn)為是細(xì)菌毒力和抗原變移的主要來源。為了研究PPE13蛋白在牛分枝桿菌感染宿主細(xì)胞中的作用,本研究首先通過基因克隆技術(shù)在無致病性的恥垢分枝桿菌中構(gòu)建了PPE13表達(dá)菌株（Ms_PPE13）。首先采用PCR技術(shù)擴增ppe13基因片段,克隆至載體p MN437中,進而電轉(zhuǎn)至恥垢分枝桿菌中,經(jīng)Western blotting驗證PPE13蛋白可在恥垢分枝桿菌中表達(dá),并且位于細(xì)胞壁中。細(xì)菌體外生長試驗發(fā)現(xiàn)PPE13的表達(dá)不影響恥垢分枝桿菌在體外的生長。我們用表達(dá)PPE13的重組恥垢分枝桿菌Ms_PPE13感染小鼠巨噬細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)PPE13雖然不影響恥垢分枝桿菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)的存活,但... 

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一部分 文獻綜述
    1 牛分枝桿菌概述
    2 牛結(jié)核病發(fā)生及流行
    3 牛分枝桿菌致病力
    4 牛分枝桿菌PE/PPE蛋白家族
    5 促炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α
    6 炎癥復(fù)合體NLRP3
    7 研究目的及意義
第二部分 試驗研究
    第一章 PPE13在恥垢分枝桿菌中表達(dá)的重組菌株構(gòu)建
        1 材料與儀器
        2 試驗方法
        3 試驗結(jié)果
        4 小結(jié)與討論
    第二章 牛分枝桿菌PPE13促進IL-1β的分泌
        1 材料與儀器
        2 試驗方法
        3 試驗結(jié)果
        4 小結(jié)與討論
    第三章 牛分枝桿菌PPE13促進炎癥復(fù)合體NLRP3的活化
        1 材料與儀器
        2 方法
        3 試驗結(jié)果
        4 小結(jié)與討論
全文總結(jié)
參考文獻
附錄Ⅰ 中英文對照
附錄Ⅱ 試驗所需引物
個人簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]顆粒顯色指示技術(shù)快速檢測結(jié)核分枝桿菌對吡嗪酰胺耐藥性的價值[J]. 王冬敏,林健雄,彭東東,李進展,李耿聰,李鴻檳,陳蕊明.  中國防癆雜志. 2011(09)



本文編號：3679245