抗菌肽是一類含有半胱氨酸的陽(yáng)離子肽,存在于多種生物中。能夠抗革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、真菌、原蟲、病毒等多種微生物,是天然免疫反應(yīng)的主要組成部分,是連接大然免疫和獲得性免疫反應(yīng)的紐帶�？咕哪芸焖賳�(dòng)免疫系統(tǒng),在機(jī)體抵抗病原微生物中具有重要作用。肺泡巨噬細(xì)胞是機(jī)體清除病原微生物的重要部位。LPS是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁成分,LPS刺激TLRs后能引起炎癥反應(yīng),激活巨噬細(xì)胞及單核細(xì)胞后能促使炎癥因子的釋放。因此本文以綿羊肺泡巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象,利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)篩選免疫相關(guān)基因,并對(duì)所獲得基因進(jìn)行克隆、誘導(dǎo)表達(dá)以及生物學(xué)功能檢測(cè),為動(dòng)物抗病育種與疫苗免疫佐劑的研究提供理論基礎(chǔ)。本研究主要包括以下內(nèi)容：（1）采用Solexa測(cè)序技術(shù)對(duì)綿羊肺泡巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序。對(duì)LPS誘導(dǎo)的肺泡巨噬細(xì)胞和未誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞分別進(jìn)行測(cè)序,尋找免疫相關(guān)基因。將測(cè)序所得conting經(jīng)拼接后獲得67734條Uningene,其中發(fā)現(xiàn)54019條是新Unigene。其中64%Unigene與牛的基因序列具有同源性。差異表達(dá)基因GO功能顯著性富集分析,發(fā)現(xiàn)182個(gè)免疫相關(guān)基因。未誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞之間存... 

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
目錄
英文縮略詞表
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述 抗菌肽研究進(jìn)展
    1 抗菌肽的分類與特點(diǎn)
        1.1 抗菌肽的分類
        1.2 抗菌肽的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
    2 影響抗菌肽活性的因素
        2.1 抗菌肽自身因素
        2.2 生物膜因素
    3 抗菌肽的生物活性
        3.1 抗細(xì)菌活性
        3.2 抗病毒活性
        3.3 抗腫瘤活件
        3.4 抗寄生蟲活性
    4 抗菌肽的應(yīng)用前景
        4.1 飼料添加劑
        4.2 抗菌肽在臨床中的應(yīng)用
第二章 試驗(yàn)部分
    試驗(yàn)一 綿羊巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)構(gòu)建以及Solexa測(cè)序
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 綿羊肺泡巨噬細(xì)胞形態(tài)觀察
            2.2 RNA檢測(cè)
            2.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
        3 討論
    試驗(yàn)二 NK-Lysin基因在畢赤酵母中的誘導(dǎo)表達(dá)
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 RT-PCR擴(kuò)增與克隆載體酶切檢測(cè)
            2.2 綿羊NK-Lysin基因進(jìn)化樹分析及蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            2.3 重組質(zhì)粒pPIC9K-NK-Lysin酶切鑒定
            2.4 多重拷貝子的篩選與鑒定
            2.5 誘導(dǎo)表達(dá)及SDS-PAGE檢測(cè)
        3 討論
    試驗(yàn)三 NK-Lysin基因在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)及活性的初步檢測(cè)
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 pET-32α-NK-Lysin質(zhì)粒酶切鑒定
            2.2 NK-Lysin蛋白在DE_3中的表達(dá)
            2.3 NK-Lysin重組蛋白誘導(dǎo)條件優(yōu)化
            2.4 NK-Lysin重組蛋白純化與Western Blot分析
            2.5 抑菌活性檢測(cè)
        3 討論
    試驗(yàn)四 NK-Lysin在LPS不同誘導(dǎo)條件下及免疫器官中表達(dá)量動(dòng)態(tài)分析
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 NK-Lysin與GAPDH基因的克隆
            2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線生成
            2.3 綿羊NK-Lysin基因在不同誘導(dǎo)情況下表達(dá)量分析
            2.4 綿羊NK-Lysin基因在不同免疫器官中的表達(dá)量分析
        3 討論
    試驗(yàn)五 綿羊GM-CSF原核表達(dá)及對(duì)免疫細(xì)胞影響的觀察
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 RT-PCR擴(kuò)增
            2.2 基因序列分析
            2.3 GM-CSF蛋白結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)
            2.4 pET-32α-GM-CSF質(zhì)粒酶切鑒定
            2.5 重組菌體蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
            2.6 GM-CSF對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響
        3 討論
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)歷
導(dǎo)師評(píng)閱表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3675892