研究現(xiàn)狀及研究意義:從2015年3月以來,在我國江蘇、安徽、山東等地養(yǎng)鴨場陸續(xù)出現(xiàn)了以喙舌發(fā)育不良、舌頭外露、生長緩慢、痢疾、癱瘓等為特征的傳染性疾病,被稱為“短喙-侏儒綜合征”。據(jù)統(tǒng)計肉鴨死亡率為2%~6%,感染率在10%~30%,發(fā)病率嚴(yán)重的鴨場甚至能夠達(dá)到50%,發(fā)病鴨由于喙舌發(fā)育不良而造成飲食困難,從而造成嚴(yán)重消瘦,體重比正常鴨降低20%~30%,由于生產(chǎn)性能的下降,嚴(yán)重威脅著肉鴨養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。研究方法和結(jié)果:本研究通過瓊脂擴(kuò)散試驗,PCR擴(kuò)增試驗及測序方法從泰安某病鴨場分離到1株鴨源新型鵝細(xì)小病毒。通過同源性分析,發(fā)現(xiàn)本試驗獲得的SD01毒株與國內(nèi)外15個參考毒株的同源性在79.6%-98.5%之間。通過血凝試驗,發(fā)現(xiàn)鴨源新型鵝細(xì)小病毒不能夠凝集雞、鴨和鵝的紅細(xì)胞。由于檢測鴨源新型鵝細(xì)小病毒的方法目前還不夠完善,為提高其準(zhǔn)確性和效率,本研究選擇鴨源新型鵝細(xì)小病毒N-GPV基因作為目標(biāo)基因,以陽性重組質(zhì)粒作標(biāo)準(zhǔn)曲線,構(gòu)建鴨源新型鵝細(xì)小病毒的熒光定量PCR檢測方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)熒光定量PCR的溶解曲線均出現(xiàn)了窄而尖的單峰,說明引物具有特異性,可用于熒光定量PCR的擴(kuò)增。N-GPV... 

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 鵝細(xì)小病毒簡介
    1.2 鵝細(xì)小病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)及理化特性
    1.3 鵝細(xì)小病毒的培養(yǎng)特性
    1.4 鵝細(xì)小病毒流行特點
    1.5 鴨短喙侏儒綜合癥概述
    1.6 鵝細(xì)小病毒診斷方法
        1.6.1 臨床診斷方法
        1.6.2 血清學(xué)診斷方法
        1.6.3 分子生物學(xué)方法
2 本研究的目的及意義
3 試驗材料和方法
    3.1 試驗材料
        3.1.1 病毒與試驗動物
        3.1.2 主要試劑及化學(xué)藥品
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要試劑配制
    3.2 試驗方法
        3.2.1 鴨源新型鵝細(xì)小病毒的分離鑒定
        3.2.2 瓊脂擴(kuò)散試驗
        3.2.3 血凝試驗
        3.2.4 EID50的測定
        3.2.5 SYBR GreenⅠ熒光定量檢測新型鵝細(xì)小病毒(SD01 株)方法的建立
        3.2.6 動物試驗
4 試驗結(jié)果
    4.1 鴨源新型鵝細(xì)小病毒的分離鑒定
    4.2 序列同源性和親緣性分析結(jié)果
    4.3 瓊脂擴(kuò)散試驗
    4.4 血凝試驗
    4.5 EID50 測定結(jié)果
    4.6 熒光定量PCR檢測GPV標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    4.7 熒光定量PCR特異性試驗結(jié)果
    4.8 熒光定量PCR敏感性試驗結(jié)果
    4.9 動物試驗結(jié)果
        4.9.1 組織病理變化
        4.9.2 熒光定量PCR檢測動物組織樣品
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鴨細(xì)小病毒套式PCR檢測方法的建立與應(yīng)用[J]. 竇硯國,陳浩,鄭肖強(qiáng),于相龍,楊晶,牛曉宇,刁有祥.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2016(10)
[2]鴨短喙-侏儒綜合征及其病原的初步研究[J]. 崔元,王建昌,李玉保,經(jīng)美,張姍,陳萍,孫繼國,袁萬哲.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2016(05)
[3]細(xì)胞傳代致弱的鵝細(xì)小病毒YG毒株致病性變化的研究[J]. 邵周伍林,李晨曦,劉明,張青山,張云.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2016(01)
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[6]快速診斷小鵝瘟PCR方法的優(yōu)化建立[J]. 趙磊,王旋,龔爭,吳章青,張訓(xùn)海.  安徽科技學(xué)院學(xué)報. 2014(06)
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博士論文
[1]鵝細(xì)小病毒非結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)蛋白B細(xì)胞線性抗原表位區(qū)的篩選[D]. 于天飛.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[2]鵝細(xì)小病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因遺傳進(jìn)化分析及其基因免疫研究[D]. 趙麗榮.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006

碩士論文
[1]鴨源新型鵝細(xì)小病毒的分離鑒定和全基因組序列測定分析[D]. 鄭肖強(qiáng).山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]鵝細(xì)小病毒的分離鑒定及PCR-DHPLC檢測方法的建立與初步應(yīng)用[D]. 饒桂波.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]番鴨細(xì)小病毒的分離鑒定、VP基因的克隆及其原核表達(dá)[D]. 王欣.西南大學(xué) 2008



本文編號：3675763