研究現(xiàn)狀及研究意義:從2015年3月以來(lái),在我國(guó)江蘇、安徽、山東等地養(yǎng)鴨場(chǎng)陸續(xù)出現(xiàn)了以喙舌發(fā)育不良、舌頭外露、生長(zhǎng)緩慢、痢疾、癱瘓等為特征的傳染性疾病,被稱(chēng)為“短喙-侏儒綜合征”。據(jù)統(tǒng)計(jì)肉鴨死亡率為2%~6%,感染率在10%~30%,發(fā)病率嚴(yán)重的鴨場(chǎng)甚至能夠達(dá)到50%,發(fā)病鴨由于喙舌發(fā)育不良而造成飲食困難,從而造成嚴(yán)重消瘦,體重比正常鴨降低20%~30%,由于生產(chǎn)性能的下降,嚴(yán)重威脅著肉鴨養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。研究方法和結(jié)果:本研究通過(guò)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),PCR擴(kuò)增試驗(yàn)及測(cè)序方法從泰安某病鴨場(chǎng)分離到1株鴨源新型鵝細(xì)小病毒。通過(guò)同源性分析,發(fā)現(xiàn)本試驗(yàn)獲得的SD01毒株與國(guó)內(nèi)外15個(gè)參考毒株的同源性在79.6%-98.5%之間。通過(guò)血凝試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)鴨源新型鵝細(xì)小病毒不能夠凝集雞、鴨和鵝的紅細(xì)胞。由于檢測(cè)鴨源新型鵝細(xì)小病毒的方法目前還不夠完善,為提高其準(zhǔn)確性和效率,本研究選擇鴨源新型鵝細(xì)小病毒N-GPV基因作為目標(biāo)基因,以陽(yáng)性重組質(zhì)粒作標(biāo)準(zhǔn)曲線,構(gòu)建鴨源新型鵝細(xì)小病毒的熒光定量PCR檢測(cè)方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)熒光定量PCR的溶解曲線均出現(xiàn)了窄而尖的單峰,說(shuō)明引物具有特異性,可用于熒光定量PCR的擴(kuò)增。N-GPV... 

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 鵝細(xì)小病毒簡(jiǎn)介
    1.2 鵝細(xì)小病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)及理化特性
    1.3 鵝細(xì)小病毒的培養(yǎng)特性
    1.4 鵝細(xì)小病毒流行特點(diǎn)
    1.5 鴨短喙侏儒綜合癥概述
    1.6 鵝細(xì)小病毒診斷方法
        1.6.1 臨床診斷方法
        1.6.2 血清學(xué)診斷方法
        1.6.3 分子生物學(xué)方法
2 本研究的目的及意義
3 試驗(yàn)材料和方法
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 病毒與試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要試劑及化學(xué)藥品
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要試劑配制
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 鴨源新型鵝細(xì)小病毒的分離鑒定
        3.2.2 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)
        3.2.3 血凝試驗(yàn)
        3.2.4 EID50的測(cè)定
        3.2.5 SYBR GreenⅠ熒光定量檢測(cè)新型鵝細(xì)小病毒(SD01 株)方法的建立
        3.2.6 動(dòng)物試驗(yàn)
4 試驗(yàn)結(jié)果
    4.1 鴨源新型鵝細(xì)小病毒的分離鑒定
    4.2 序列同源性和親緣性分析結(jié)果
    4.3 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)
    4.4 血凝試驗(yàn)
    4.5 EID50 測(cè)定結(jié)果
    4.6 熒光定量PCR檢測(cè)GPV標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    4.7 熒光定量PCR特異性試驗(yàn)結(jié)果
    4.8 熒光定量PCR敏感性試驗(yàn)結(jié)果
    4.9 動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果
        4.9.1 組織病理變化
        4.9.2 熒光定量PCR檢測(cè)動(dòng)物組織樣品
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]鴨短喙-侏儒綜合征及其病原的初步研究[J]. 崔元,王建昌,李玉保,經(jīng)美,張姍,陳萍,孫繼國(guó),袁萬(wàn)哲.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2016(05)
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博士論文
[1]鵝細(xì)小病毒非結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)蛋白B細(xì)胞線性抗原表位區(qū)的篩選[D]. 于天飛.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[2]鵝細(xì)小病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因遺傳進(jìn)化分析及其基因免疫研究[D]. 趙麗榮.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006

碩士論文
[1]鴨源新型鵝細(xì)小病毒的分離鑒定和全基因組序列測(cè)定分析[D]. 鄭肖強(qiáng).山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]鵝細(xì)小病毒的分離鑒定及PCR-DHPLC檢測(cè)方法的建立與初步應(yīng)用[D]. 饒桂波.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]番鴨細(xì)小病毒的分離鑒定、VP基因的克隆及其原核表達(dá)[D]. 王欣.西南大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3675763