【目的】克隆雞含溴結(jié)構(gòu)域蛋白2（BRD2）基因及其剪接體,并對其進行序列分析和亞細胞定位,為深入研究雞BRD2基因及其剪接體在細胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用機理打下基礎(chǔ)。【方法】通過RT-PCR擴增雞BRD2基因及其剪接體的編碼區(qū)（CDS）序列,采用BioEdit、ProtParam、SOPMA、SWISS-MODEL、CDART等在線軟件進行生物信息學(xué)分析;雞BRD2基因及其剪接體經(jīng)Xho I和Bam H I雙酶切后,分別亞克隆至真核表達載體pEGFP-C1多克隆位點上構(gòu)建重組真核表達載體,通過轉(zhuǎn)染HEK-293T細胞進行亞細胞定位分析。【結(jié)果】雞BRD2基因CDS序列全長2340 bp,編碼779個氨基酸殘基,分子量為85.66 k D,理論等電點（pI）為8.74,其編碼蛋白二級結(jié)構(gòu)主要由無規(guī)則卷曲（60.59%）和α-螺旋（28.50%）組成,含有3個明顯的功能結(jié)構(gòu)域（2個BD結(jié)構(gòu)域和1個ET結(jié)構(gòu)域）。與雞BRD2基因相比,其剪接體BRD2-X1、BRD2-X2和BRD2-X3的CDS序列長分別為2301、2283和1983 bp,編碼766、760和660個氨基酸殘基。以雞BRD2氨基... 

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【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
    1.2 引物設(shè)計與合成
    1.3 雞BRD2基因及其剪接體克隆與測序分析
    1.4 雞BRD2基因及其剪接體重組真核表達載體構(gòu)建
    1.5 細胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
    1.6 雞BRD2基因及其剪接體融合蛋白熒光觀察
2 結(jié)果與分析
    2.1 雞BRD2基因及其剪接體的克隆和重組真核表達載體構(gòu)建
    2.2 雞BRD2基因及其剪接體的生物信息學(xué)分析結(jié)果
        2.2.1雞BRD2基因及其剪接體編碼蛋白理化性質(zhì)和功能結(jié)構(gòu)域預(yù)測分析結(jié)果
        2.2.2 雞BRD2蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測和功能結(jié)構(gòu)域保守性分析結(jié)果
        2.2.3 雞BRD2蛋白的互作蛋白預(yù)測結(jié)果
        2.2.4 雞BRD2基因核苷酸序列相似性和遺傳進化分析結(jié)果
    2.3 雞BRD2蛋白及其剪接體亞細胞定位分析結(jié)果
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]部分雞種Brd2基因SNP和INDEL分析[J]. 吳允,畢榆林,張揚,郭曉敏,李志騰,萬方,朱鵬飛,徐璐,常國斌,徐琪,陳國宏.  安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2017(02)
[2]mRNA選擇性剪接的分子機制[J]. 章國衛(wèi),宋懷東,陳竺.  遺傳學(xué)報. 2004(01)

博士論文
[1]秦川牛脂肪沉積相關(guān)基因篩選及可變剪接對基因表達和細胞定位的影響研究[D]. 周揚.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017

碩士論文
[1]BRD2核定位信號的核定位功能和細胞凋亡始動功能的初步研究[D]. 何佳瑾.中南大學(xué) 2007



本文編號：3675021