發(fā)布時間：2022-08-11 12:56

　　依據(jù)微生物抑制法研制的檢測牛奶中抗生素殘留的試劑盒,因其使用方法簡便而被廣泛應(yīng)用。目前試劑盒中的指示菌普遍采用嗜熱脂肪芽孢桿菌。本研究以營養(yǎng)需求低、短時間內(nèi)生長產(chǎn)酸、對常用抗生素敏感為基本原則,從高溫環(huán)境中分離高溫菌。以期分離得到符合試劑盒指示菌要求的菌株,并依據(jù)微生物抑制法原理,采用分離的菌株研發(fā)試劑盒。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：1)菌株的分離。從福州市晉安區(qū)洗滌廠排熱口采集樣品,將采集的水樣和泥樣混合并離心,處理后的混合液涂布于固體培養(yǎng)基中,置于55℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。依據(jù)菌落特征挑取生長較快的單菌落。初步分離純化得到8株菌。2)菌株的篩選鑒定。依據(jù)能夠在短時間內(nèi)使培養(yǎng)液pH值降低、在簡單的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長良好、對常用抗生素敏感三個指標,對8株菌進行復(fù)篩,得到一株目標菌株FZ。經(jīng)過16S rDNA序列分析,結(jié)合菌落形態(tài)、菌體形態(tài)、芽孢形態(tài)分析,確定菌株FZ屬于厭氧桿菌屬（Anoxybacillus）。3)試劑盒制備及參數(shù)優(yōu)化。在單因素試驗的基礎(chǔ)上對包埋營養(yǎng)物進行優(yōu)化,得出最佳包埋物為：0.3%葡萄糖、0.2%蛋白胨、0.1%牛肉膏；考察三種指示劑顯色情況,確定溴甲酚紫作為最佳... 

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 牛奶產(chǎn)業(yè)鏈中抗生素殘留現(xiàn)狀
        1.1.1 抗生素殘留途徑
        1.1.2 抗生素殘留種類
        1.1.3 抗生素殘留危害
        1.1.4 最大殘留量規(guī)定
    1.2 檢測方法研究進展
        1.2.1 微生物檢測法
        1.2.2 酶聯(lián)免疫法
        1.2.3 理化檢測法
        1.2.4 免疫傳感器法
    1.3 本課題選題依據(jù)、主要研究內(nèi)容與創(chuàng)新點
        1.3.1 選題依據(jù)
        1.3.2 主要研究內(nèi)容
        1.3.3 創(chuàng)新點
第二章 指示菌的篩選
    2.1 試驗儀器、材料與試劑
        2.1.1 儀器
        2.1.2 材料
    2.2 試驗方法
        2.2.1 樣品采集及處理
        2.2.2 分離菌株產(chǎn)酸及生長情況測定
        2.2.3 藥敏試驗
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 采樣地環(huán)境
        2.3.2 分離菌株的生長曲線及產(chǎn)酸特性
        2.3.3 藥敏試驗結(jié)果
    2.4. 討論
第三章 指示菌株的鑒定
    3.1 試驗儀器、材料與試劑
        3.1.1 試驗儀器
        3.1.2 試驗材料
        3.1.3 試劑及配制
    3.2 試驗方法
        3.2.1 菌體形態(tài)特征及生長特性
        3.2.2 菌體分子鑒定
        3.2.3 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.4 序列分析及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 FZ菌體形態(tài)特征及生長特性
        3.3.2 分離菌體16S rDNA序列分析
    3.4討論
第四章 檢測抗生素殘留試劑盒的制備
    4.1 試驗材料
        4.1.1 培養(yǎng)基
        4.1.2 試劑及配制
    4.2 試驗方法
        4.2.1 產(chǎn)芽孢培養(yǎng)基的篩選及優(yōu)化
        4.2.2 芽孢的收集
        4.2.3 抗生素殘留樣品的制備
        4.2.4 試劑盒制備流程
        4.2.5 試劑盒參數(shù)的優(yōu)化
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 產(chǎn)芽孢培養(yǎng)基的篩選及優(yōu)化
        4.3.2 包埋瓊脂營養(yǎng)物質(zhì)正交實驗設(shè)計
        4.3.3 包埋營養(yǎng)物質(zhì)中指示劑的選擇
        4.3.4 芽孢最佳包埋濃度的確定
        4.3.5 最佳牛乳添加量的確定
    4.4 討論
第五章 試劑盒的應(yīng)用
    5.1 試驗材料
    5.2 試驗方法
        5.2.1 試劑盒檢測線確定
        5.2.2 試劑盒均一度測試
        5.2.3 試劑盒的應(yīng)用
    5.3 結(jié)果分析
        5.3.1 試劑盒檢測限確定
        5.3.2 試劑盒均一度測定
        5.3.3 試劑盒的應(yīng)用
    5.4 討論
結(jié)論和展望
    結(jié)論
    展望
參考文獻
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]根據(jù)藥代動力學(xué)/藥效動力學(xué)理論合理使用氨基糖苷類抗生素[J]. 施毅,李培.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2012 (10)
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碩士論文
[1]乳中抗生素殘留微生物抑制法檢測試劑的研究[D]. 封倩.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3674700