【目的】建立豬骨骼肌衛(wèi)星細胞體外分離、純化及鑒定的方法,并對其生物學(xué)特性進行探討,為進一步研究豬肌肉生長發(fā)育提供良好的細胞模型。【方法】選取1日齡仔豬背最長肌為材料,無菌狀態(tài)下將背最長肌剪碎為肉糜狀。此后采用濃度為0.2%的Ⅰ型膠原酶消化90 min,再加入濃度為0.25%的胰蛋白酶37℃聯(lián)合消化30 min。經(jīng)終止消化、過濾、重懸后將分離得到的細胞置于37℃、5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。選用反復(fù)差速貼壁法對骨骼肌衛(wèi)星細胞進行純化,第一次純化選擇在細胞接種2 h后,將未貼壁細胞轉(zhuǎn)移至新培養(yǎng)皿。上清液繼續(xù)培養(yǎng)18 h后,對衛(wèi)星細胞進行第二次差速貼壁純化。當(dāng)細胞密度達70%—80%時可對細胞進行傳代或凍存處理。利用細胞免疫熒光技術(shù)檢測P2代衛(wèi)星細胞標(biāo)志基因Pax7、MyoD的蛋白表達情況,并繪制衛(wèi)星細胞生長曲線。分別添加不同誘導(dǎo)分化液使衛(wèi)星細胞定向分化為肌細胞、脂肪細胞、成骨細胞,檢測成肌分化標(biāo)志基因MHC的免疫熒光,鑒定衛(wèi)星細胞肌管形成情況;油紅O染色及油紅O定量鑒定衛(wèi)星細胞誘導(dǎo)成脂分化效果;茜素紅染色鑒定衛(wèi)星細胞成骨分化能力,qRT-PCR檢測成肌、成脂、成骨進程... 

【文章頁數(shù)】：13 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 主要試劑
        1.1.1 試驗動物
        1.1.2 主要試劑
    1.2 骨骼肌衛(wèi)星細胞的分離及純化
    1.3 骨骼肌衛(wèi)星細胞的傳代與凍存
    1.4 骨骼肌衛(wèi)星細胞的免疫熒光染色鑒定
    1.5 骨骼肌衛(wèi)星細胞生長曲線
    1.6 骨骼肌衛(wèi)星細胞成肌誘導(dǎo)及鑒定
    1.7 骨骼肌衛(wèi)星細胞成脂誘導(dǎo)及鑒定
    1.8 骨骼肌衛(wèi)星細胞成骨誘導(dǎo)及鑒定
    1.9 RNA提取及相關(guān)基因q RT-PCR檢測
    1.1 0 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 骨骼肌衛(wèi)星細胞形態(tài)學(xué)觀察
    2.2 骨骼肌衛(wèi)星細胞免疫熒光鑒定
    2.3 骨骼肌衛(wèi)星細胞生長曲線
    2.4 骨骼肌衛(wèi)星細胞成肌誘導(dǎo)
    2.5 骨骼肌衛(wèi)星細胞成脂誘導(dǎo)
    2.6 骨骼肌衛(wèi)星細胞成骨誘導(dǎo)
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]山羊胎兒肌肉干細胞的分離培養(yǎng)與成肌誘導(dǎo)分化[J]. 睢夢華,鄭琪,吳昊,丁建平,劉勇,李文雍,儲明星,張子軍,凌英會.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(08)
[2]New insights into the epigenetic control of satellite cells[J]. Viviana Moresi,Nicoletta Marroncelli,Sergio Adamo.  World Journal of Stem Cells. 2015(06)
[3]高糖誘導(dǎo)山羊骨骼肌衛(wèi)星細胞成脂分化過程中相關(guān)基因表達的變化[J]. 薛科,王林杰,陳利,王薏琳,仲濤,李利,張紅平.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2014(05)
[4]北京油雞骨骼肌衛(wèi)星細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及成肌誘導(dǎo)分化的研究[J]. 李方華,侯玲玲,馬月輝,龐全海,關(guān)偉軍.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(22)



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