Fosl2（Fos-like antigen2）屬于活化因子蛋白1（activator protein-1,AP1）轉(zhuǎn)錄因子家族中的一種，在多種組織中均有顯著表達，對哺乳動物的生長發(fā)育、生殖性狀、免疫應答等方面起到重要的作用。近年來，隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)Fosl2基因與脂肪代謝、骨骼發(fā)育以及疾病和癌癥的發(fā)生有著重要聯(lián)系；Leptin基因是人們最早發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)能量代謝的基因。本研究在實驗室前期工作的基礎(chǔ)上，以豫南黑豬為試驗材料，對Fosl2和Leptin進行克隆測序及生物學信息分析，研究了豫南黑豬在不同發(fā)育時期及不同組織中的發(fā)育差異性表達，以期探索Fosl2和Leptin在豬不同發(fā)育階段中所起的作用，從基因角度闡明豫南黑豬的組織表達譜規(guī)律。根據(jù)NCBI中GenBank已經(jīng)公布的人、鼠、牛和大猩猩Fosl2的mRNA序列，利用計算機軟件DNAstar進行基因序列的同源性比對，找出不同物種之間Fosl2基因cDNA的保守區(qū)域后設(shè)計特異性引物，采用RT-PCR技術(shù)克隆基因，利用克隆的堿基序列作為探針在NCBI中進行同源性比對，利用生物信息學軟件對兩種基因的氨基酸結(jié)構(gòu)和序列特征進行分析和預測，... 

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
目錄
摘要
Abstract
第零部分 文獻綜述
    0.1 Fosl2 基因的研究進展及應用
        0.1.1 Fosl2 的基因定位與結(jié)構(gòu)
        0.1.2 Fosl2 基因的組織表達分布
        0.1.3 Fosl2 的功能研究
        0.1.4 展望
    0.2 Fosl2 基因與 Leptin 基因在脂肪代謝中的聯(lián)系
    0.3 Leptin 基因的研究進展
        0.3.1 Leptin 的發(fā)現(xiàn)
        0.3.2 Leptin 基因的結(jié)構(gòu)與定位
        0.3.3 Leptin 的功能
        0.3.4 小結(jié)
    0.4 實時熒光定量 PCR 技術(shù)
        0.4.1 實時熒光定量 PCR 原理
        0.4.2 熒光定量 PCR 的定量方法
        0.4.3 實時熒光定量 PCR 技術(shù)的應用
第一部分 引言
第二部分 豫南黑豬 Fosl2基因的克隆、生物學信息分析與組織表達
    第一章 豫南黑豬 Fosl2基因的克隆與生物信息分析
        2.1 基因克隆試驗材料
            2.1.1 菌株和克隆載體
            2.1.2 試驗動物組織樣
            2.1.3 主要儀器和設(shè)備
            2.1.4 主要試劑和溶液
        2.2 試驗方法和步驟
            2.2.1 PCR 引物設(shè)計和合成
            2.2.2 動物組織總 RNA 的提取
            2.2.3 RT-PCR 擴增 Fosl2 部分序列
            2.2.4 DNA 瓊脂糖凝膠電泳
            2.2.5 cDNA 的克隆及重組質(zhì)粒的篩選鑒定
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 總 RNA 的提取結(jié)果
            2.3.2 反轉(zhuǎn)錄反應中內(nèi)參基因的擴增
            2.3.3 RT-PCR 擴增結(jié)果
            2.3.4 陽性克隆的篩選和鑒定
            2.3.5 RT-PCR 產(chǎn)物的測序
            2.3.6 豫南黑豬 Fosl2 基因 CDS 序列的多物種比較
            2.3.7 豫南黑豬 Fosl2 基因 CDS 的生物信息學分析及其比較
    第二章 豫南黑豬 Fosl2 基因在不同組織以及不同時期的表達分析
        2.4 材料與方法
            2.4.1 試驗動物和樣品準備
            2.4.2 主要儀器和試劑
            2.4.3 RNA 提取和 cDNA 合成
            2.4.4 PCR 引物設(shè)計與擴增條件優(yōu)化
            2.4.5 實時熒光定量 PCR 的表達分析
        2.5 結(jié)果與分析
            2.5.1 RNA 的純度與完整性
            2.5.2 熒光定量 PCR 擴增曲線和溶解曲線
            2.5.3 豫南黑豬不同發(fā)育時期 Fosl2 基因的組織表達研究
        2.6 討論
        2.7 小結(jié)
第三部分 豫南黑豬Leptin基因的克隆、生物學信息分析與組織表達
    第一章 豫南黑豬Leptin基因的克隆與生物信息分析
        3.1 基因克隆實驗材料
        3.2 材料與方法
            3.2.1 PCR引物設(shè)計和合成
            3.2.2 動物組織總RNA的提取
            3.2.3 RT-PCR擴增Leptin部分序列
            3.2.4 DNA 瓊脂糖凝膠電泳
            3.2.5 cDNA 的克隆及重組質(zhì)粒的篩選鑒定
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 總RNA的提取結(jié)果
            3.3.2 反轉(zhuǎn)錄反應中內(nèi)參基因的擴增
            3.3.3 RT-PCR擴增結(jié)果
            3.3.4 陽性克隆的篩選和鑒定
            3.3.5 RT-PCR產(chǎn)物的測序
            3.3.6 豫南黑豬Leptin基因CDS序列的多物種比較
            3.3.7 電子克隆豫南黑豬 Leptin 基因 CDS 序列的生物信息學分析
    第二章 豫南黑豬 Leptin 基因在不同組織及不同時期的表達分析
        3.4 材料與方法
        3.5 結(jié)果與分析
            3.5.1 RNA 的純度與完整性
            3.5.2 熒光定量 PCR 擴增曲線和溶解曲線
            3.5.3 不同組織不同時期 Leptin 基因 mRNA 水平的差異比較
            3.5.4 Fosl2 基因和 Leptin 基因在豫南黑豬不同發(fā)育時期的組織表達特點比較
        3.6 討論
        3.7 小結(jié)
第四部分 結(jié)論
第五部分 創(chuàng)新點及下一步的工作展望
參考文獻



本文編號：3669729