陰陽因子1（YY1）是一種廣泛存在于生物體中并在進(jìn)化上高度保守的轉(zhuǎn)錄因子,它可以作為基因表達(dá)過程中的激活因子和抑制因子參與許多基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。為了解YY1基因在水牛植入前胚胎中的表達(dá)規(guī)律及其對(duì)DNA甲基化的影響和調(diào)控作用,本研究克隆了水牛YY1基因編碼序列,構(gòu)建了其真核表達(dá)載體；篩選抑制水牛YY1基因表達(dá)的shRNA干擾片段,同時(shí)探討了YY1基因過表達(dá)對(duì)水牛胚胎早期發(fā)育及DNA甲基化的影響。1.水牛YYl基因CDS全長(zhǎng)序列克隆及其真核表達(dá)載體構(gòu)建。以水牛成纖維細(xì)胞cDNA為模板,采用RT-PCR和降落PCR的方法,擴(kuò)增水牛YY1基因CDS全長(zhǎng)序列。將目的片段連接到pEGFP-N1載體中構(gòu)建真核表達(dá)載體,然后轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞和水牛成纖維細(xì)胞（BFF）,通過熒光觀察和qRT-PCR方法檢測(cè)YY1基因表達(dá)情況。結(jié)果顯示,克隆得到的水牛YY1基因CDS全長(zhǎng)序列為1248bp,與牛、人、小鼠、大鼠及雞的同源性達(dá)到90%以上。重組質(zhì)粒pYY1-EGFP-N1可在293T細(xì)胞和水牛成纖維細(xì)胞中表達(dá)；在水牛體細(xì)胞水平上,YY1基因表達(dá)可促進(jìn)DNMT1基因的表達(dá)。2.水牛YY1基因表達(dá)shRNA干擾片段... 

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 YY1基因概述
        1. YY1基因簡(jiǎn)介
        2. YY1基因結(jié)構(gòu)
        3. YY1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能
            3.1 YY1基因介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄抑制作用
            3.2 YY1基因介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活作用
        4. YY1基因在哺乳動(dòng)物發(fā)育過程中的作用
            4.1 YY1基因與配子生成、胚胎發(fā)育的關(guān)系
            4.2 YY1基因與細(xì)胞增殖、分化及凋亡的關(guān)系
        5. YY1基因與表觀遺傳修飾
            5.1 DNA甲基化與組蛋白甲基化、乙酰化
            5.2 YY1基因與DNA甲基化和組蛋白修飾
        6. 課題研究目的及意義
第二部分 試驗(yàn)研究
    第二章 水牛YY1基因表達(dá)載體構(gòu)建及shRNA片段篩選
        第一節(jié) 水牛YY1基因克隆及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建
            摘要
            1. 材料與方法
                1.1 材料
                1.2 方法
            2 結(jié)果
                2.1 水牛YY1基因克隆與測(cè)序分析
                2.2 水牛YY1基因真核表達(dá)載體構(gòu)建
                2.3 YY1基因真核表達(dá)載體檢測(cè)
            3 分析與討論
            4 結(jié)論
        第二節(jié) 水牛YY1基因shRNA片段的篩選
            摘要
            1 材料與方法
                1.1 材料
                1.2 方法
            2 結(jié)果
                2.1 水牛YY1shRNA重組質(zhì)粒的鑒定
                2.2 YY1 shRNA抑制效率檢測(cè)
                2.3 Western-blot分析shRNA抑制效率
            3 分析與討論
            4 結(jié)論
    第三章 YY1基因過表達(dá)對(duì)水牛早期胚胎發(fā)育及DNA甲基化的影響
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 質(zhì)粒濃度對(duì)水牛受精卵胞質(zhì)注射法轉(zhuǎn)基因效率的影響
            2.2 注射不同外源DNA對(duì)水牛胚胎發(fā)育及囊胚形成率影響
            2.3 YY1基因過表達(dá)對(duì)植入前胚胎DNMT1基因表達(dá)影響
        3 分析與討論
        4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文



本文編號(hào)：3668852