研究背景與目的:潔凈良好的禽舍環(huán)境是家禽健康生長的重要前提和保障。隨著集約化、標準化程度的不斷提高,現(xiàn)代家禽舍多采用自動上料清糞、自動控溫控濕控風的層疊式籠養(yǎng)模式。但是,由于飼養(yǎng)密度高、籠器具密集,舍內溫濕度和通風量不均勻,各類粉塵、有害氣體、微生物及代謝產物等形成的氣溶膠濃度隨家禽日齡增加而增加,對家禽和飼養(yǎng)人員的健康造成極大的威脅。過高濃度的PM2.5損傷呼吸系統(tǒng)后引起的宿主免疫功能受損可能引起細菌性繼發(fā)感染,使機體產生更強烈的炎癥反應,加重肺部損傷。本研究主要探究不同養(yǎng)殖周期禽舍內PM2.5的微生物組成結構的差異,并進一步研究PM2.5與綠膿桿菌協(xié)同誘導呼吸系統(tǒng)炎癥損傷及相關分子機制。研究方法:對肉雞不同生長階段（3日齡、22日齡和40日齡）禽舍中的顆粒物（PM2.5）樣本進行采集,通過掃描電鏡觀察顆粒物的形態(tài)差異進行觀察,并對禽舍微生物氣溶膠利用16S r DNA序列分析技術,對樣本中細菌的多樣性和相對豐度進行表征。其次,分別通過體外實驗和體內實驗探究未滅活PM2.5、滅活PM2.5（PM2.5^—）與綠膿桿菌的協(xié)同致炎效果。（1）PM2.5對RAW264.... 

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 大氣顆粒物
    1.2 PM2.5的成分
        1.2.1 PM2.5的化學成分
        1.2.2 PM2.5的生物成分
        1.2.3禽舍PM2.5
    1.3 PM2.5的危害
        1.3.1 PM2.5對人體的危害
        1.3.2 PM2.5對家禽的危害
        1.3.3 PM2.5對呼吸系統(tǒng)的影響
    1.4 PM2.5影響呼吸系統(tǒng)的作用機制
        1.4.1 線粒體損傷
        1.4.2 細胞內鈣穩(wěn)態(tài)失衡
        1.4.3 氧化損傷與炎癥損傷
        1.4.4 細胞自噬與細胞凋亡
    1.5 PM2.5對巨噬細胞的影響
    1.6 綠膿桿菌的致病機制
        1.6.1 綠膿桿菌的危害
        1.6.2 綠膿桿菌的致病機制
    1.7 NF-κB信號通路與炎癥
        1.7.1 NF-κB/Rel家族蛋白
        1.7.2 NF-κB的生物學意義
        1.7.3 NF-κB信號通路的激活
    1.8 研究目的
第2章 材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞
        2.1.2 綠膿桿菌
        2.1.3 實驗動物
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 主要試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 樣品采樣地點與時間
        2.2.2 樣品采集及處理
        2.2.3 掃描電鏡觀察顆粒物(PM2.5)的形態(tài)觀察
        2.2.4 微生物多樣性分析
        2.2.5 PM2.5顆粒物混懸液的制備
        2.2.6 綠膿桿菌的培養(yǎng)
        2.2.7 細胞培養(yǎng)
        2.2.8 細胞增殖實驗
        2.2.9 NO檢測
        2.2.10 細胞中IL-6、IL-8及TNF-α的檢測
        2.2.11 細胞中NF-κB相關蛋白的檢測
        2.2.12 呼吸道模型的建立
        2.2.13 小鼠肺組織病理學觀察
        2.2.14 小鼠血清中IL-6、IL-8及TNF-α的檢測
        2.2.15 小鼠肺組織中IL-6、IL-8、TNF-α的檢測
        2.2.16 肺組織中NF-κB相關蛋白的檢測
        2.2.17 分析方法
第3章 結果
    3.1 禽舍PM2.5形態(tài)觀察
    3.2 禽舍PM2.5濃度變化及細菌微生物多樣性
        3.2.1 PM2.5的濃度變化
        3.2.2 禽舍PM2.5細菌微生物多樣性
    3.3 綠膿桿菌協(xié)同PM2.5體外致炎實驗
        3.3.1 PM2.5 可抑制RAW264.7 細胞增殖并促進NO表達
        3.3.2 PM2.5 協(xié)同綠膿桿菌促進RAW264.7 細胞中IL-6、IL-8和TNF-α表達
        3.3.3 PM2.5 協(xié)同綠膿桿菌激活RAW264.7 細胞中的NF-κB途徑
    3.4 綠膿桿菌協(xié)同PM2.5體內致炎實驗
        3.4.1 小鼠狀態(tài)觀察
        3.4.2 PM2.5協(xié)同綠膿桿菌刺激使小鼠體重持續(xù)下降
        3.4.3 PM2.5協(xié)同綠膿桿菌刺激加重小鼠肺部損傷
        3.4.4 PM2.5 協(xié)同綠膿桿菌促進小鼠血清和肺組織中IL-6、IL-8和TNF-α表達
        3.4.5 PM2.5 協(xié)同綠膿桿菌激活小鼠肺組織中的NF-κB信號通路
第4章 討論
    4.1 顆粒物(PM2.5)的形態(tài)分析及細菌多樣性分析
    4.2 綠膿桿菌協(xié)同PM2.5對炎癥的影響
第5章 結論
參考文獻
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]The effects of autophagy on vascular endothelial cells induced by airborne PM2.5[J]. Zhixiang Zhou,Tong Shao,Mengnan Qin,Xiaoyan Miao,Yu Chang,Wang Sheng,Fengshang Wu,Yunjiang Yu.  Journal of Environmental Sciences. 2018(04)



本文編號：3665838