巨噬細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分,也是病毒感染的靶細(xì)胞之一,其表面分子多種多樣,研究其表面分子的相互作用對(duì)研究病毒有非常重大的意義,為了探討馬傳染病病毒與巨噬細(xì)胞的免疫相互作用,制備具有特異性識(shí)別蛋白的單克隆抗體就顯得尤為重要。其中CD63是巨噬細(xì)胞的表面蛋白,也是四跨膜蛋白家族的一員,其本身具有四個(gè)結(jié)構(gòu)域,共717個(gè)堿基,編碼239個(gè)氨基酸,其理論分子量為25.6kDA,經(jīng)信號(hào)肽分析網(wǎng)站分析,該區(qū)并無信號(hào)肽,且具有四次跨膜結(jié)構(gòu)。已經(jīng)證實(shí)該蛋白在HIV-1在人巨噬細(xì)胞中的復(fù)制具有重要作用,且在人黑色素瘤中CD63起著腫瘤抑制的作用。本研究為獲得特異性的馬CD63單克隆抗體,通過原核以及真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)和純化CD63蛋白,并通過DNA免疫方式免疫動(dòng)物,刺激其產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng),最終制備出CD63特異性的單克隆抗體。在研究過程中發(fā)現(xiàn)CD63全長無法在體外獲得表達(dá),經(jīng)跨膜區(qū)軟件分析后,去掉跨膜區(qū)的序列,選取CD63序列297個(gè)堿基的胞外區(qū)（截短的CD63）進(jìn)行原核表達(dá),經(jīng)條件優(yōu)化后成功獲得可溶性的蛋白,但因蛋白表達(dá)量少導(dǎo)致純化困難。進(jìn)一步采用了真核表達(dá)的方式,重組質(zhì)粒構(gòu)建的策略是將具有誘導(dǎo)... 

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 四次跨膜蛋白家族與CD63
        1.1 四次跨膜蛋白家族
        1.2 CD63
        1.3 CD63 在細(xì)胞表面的表達(dá)
        1.4 CD63 在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的作用
        1.5 CD63 和癌癥
        1.6 CD63與HIV
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 馬CD63的原核表達(dá)及純化
        1.1 材料與試劑
        1.2 試驗(yàn)方法
        1.3 結(jié)果
        1.4 討論
    第二章 馬CD63 的真核表達(dá)及純化
        2.1 材料與試劑
        2.2 試驗(yàn)方法
        2.3 結(jié)果
        2.4 討論
    第三章 馬CD63 單克隆抗體的制備
        3.1 材料與主要試劑
        3.2 試驗(yàn)方法
        3.3 結(jié)果
        3.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
縮略詞
作者簡介
致謝



本文編號(hào)：3663171