phix174噬菌體E基因編碼的蛋白可以抑制靶蛋白MraY的活性,但還不能確定E蛋白與靶蛋白MraY的相互作用是在MraY的活性位點(diǎn)還是通過(guò)跨膜區(qū)某個(gè)位點(diǎn),也不能確輔助蛋白SlyD在裂解過(guò)程中的明確作用。因此兩種蛋白的研究為揭示三者之間的互作奠定基礎(chǔ)。本研究以大腸桿菌DNA為模板,采用PCR方法擴(kuò)增出591bp的SlyD基因,經(jīng)限制性內(nèi)切酶BamH Ⅰ、 Sal Ⅰ雙酶切后,與pGEX-6P-1載體連接,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞中,重組質(zhì)粒雙酶切鑒定和測(cè)序均正確的陽(yáng)性重組菌經(jīng)1mmol/L IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白SlyD,并純化后經(jīng)Western-blot分析鑒定重組蛋白SlyD的免疫學(xué)活性。結(jié)果表明,在47ku大小位置有明顯的目的條帶,說(shuō)明SlyD蛋白成功表達(dá)并得以純化。本研究以大腸桿菌DNA為模板,采用重疊PCR的方法擴(kuò)增出195bp的MraY的親水區(qū)嵌合片段AB,經(jīng)限制性內(nèi)切酶BamH Ⅰ、Sal Ⅰ雙酶切后,與pGEX-6P-1載體連接,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞中,重組質(zhì)粒雙酶切鑒定和測(cè)序均正確的陽(yáng)性重組菌經(jīng)1mmol/L IPTG誘導(dǎo)表達(dá)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
緒論
    1.1 研究的主要內(nèi)容
    1.2 研究的目的和意義
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 噬菌體概述
        1.1 噬菌體的概述
        1.2 噬菌體的生物學(xué)特性
        1.3 噬菌體制劑的研究進(jìn)展
    第二章 E蛋白及其靶蛋白和輔助蛋白
        2.1 噬菌體裂解E蛋白的概述
        2.2 靶蛋白MraY的概述
        2.3 輔助蛋白SlyD的概述
    第三章 原核表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展
        3.1 原核表達(dá)系統(tǒng)
        3.2 原核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)
        3.3 影響原核表達(dá)效率的因素
第二篇 研究?jī)?nèi)容
    第一章 SlyD蛋白的表達(dá)和純化
        1.1 材料和方法
        1.2 結(jié)果
        1.3 討論
        1.4 小結(jié)
    第二章 MraY的嵌合片段AB蛋白的表達(dá)及純化
        2.1 材料和方法
        2.2 結(jié)果
        2.3 討論
        2.4 小結(jié)
    第三章 抗SlyD和MraY的單克隆抗體的制備
        3.1 材料和方法
        3.2 結(jié)果
        3.3 討論
        3.4 小結(jié)
    第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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