發(fā)布時間：2022-07-14 11:06

　　為了增強單個蛋白在牛結核病診斷中的敏感性和抗感染中的免疫原性,試驗采用重疊延伸PCR將牛分枝桿菌cfp10基因與esat6基因融合,得到cfp10-esat6融合基因,再行重疊延伸PCR將cfp10-esat6融合基因與cfp7基因融合,得到融合基因cfp10-esat6-cfp7,并克隆至T-Vector pMD19中,構建重組質粒pMD-cfp10-esat6-cfp7。對pMD-cfp10-esat6-cfp7和pET-28a（+）進行BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切,將純化的cfp10-esat6-cfp7連接到pET-28a（+）中,獲得表達質粒pET-cfp10-esat6-cfp7,通過IPTG誘導,SDS-PAGE分析表達質粒在E.coli BL21（DE3）中的表達情況。對表達的融合蛋白進行鎳柱純化,通過Western-blot和間接ELISA分析其抗原反應性。結果表明:獲得了融合基因cfp10-esat6-cfp7,表達了約36.3 ku的融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7。融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7與10份牛結核陽性血清反應的OD_492<... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 載體、基因、菌株
    1.2 主要試劑
    1.3 引物的設計與合成
    1.4 融合基因cfp10-esat6-cfp7的獲得與克隆
    1.5 表達質粒的構建及鑒定
    1.6 融合基因的誘導與表達分析
    1.7 融合蛋白的純化與抗原反應性分析
2 結果與分析
    2.1 融合基因的PCR擴增產物
    2.2 克隆質粒的鑒定與測序
    2.3 表達質粒的鑒定與表達
    2.4 融合蛋白的抗原反應性分析
3 討論



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