布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的傳染病,不僅感染多種動(dòng)物,而且對人類健康也造成影響。CD14作為布魯氏菌細(xì)胞壁成分脂多糖（LPS）的受體以及重要的天然免疫分子,參與敗血癥引起炎癥反應(yīng)啟動(dòng)。研究表明,抑制LPS上游炎癥通路是一種有效的減弱免疫激活損害的治療方法。RNA干擾（RNAi）是一種特異的高效下調(diào)基因表達(dá)的方法,本研究的目的是探索利用RNA干擾（RNAi） knockdown mCD14,進(jìn)而研究布魯氏菌感染RAW264.7細(xì)胞microRNA的變化。實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)染含mCD14-shRNA-224的慢病毒載體于RAW264.7進(jìn)而knockdown mCD14基因,得到穩(wěn)定細(xì)胞系命名為224.3。通過qRT-PCR和Western Blot檢測RNAi對mCD14表達(dá)的抑制效果。結(jié)果顯示,RNAi能夠特異地降低mCD14 mRNA和蛋白表達(dá)水平。為了研究CD14 knockdown布魯氏菌感染引起的炎癥反應(yīng)中microRNA的變化及作用機(jī)制,布魯氏菌感染224.3細(xì)胞后,利用miRNA基因芯片和qRT-PCR對miRNA表達(dá)差異分析,并對差異表達(dá)的microRNA的靶基因進(jìn)行生物學(xué)預(yù)測。m... 

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞對照表
1. 文獻(xiàn)綜述
    1.1 白細(xì)胞分化抗原14
    1.2 布魯氏菌病研究現(xiàn)狀
    1.3 microRNA研究進(jìn)展
        1.3.1 microRNA的發(fā)現(xiàn)與命名
        1.3.2 microRNA的特征
        1.3.3 microRNA的生物合成
        1.3.4 microRNA調(diào)控機(jī)理
        1.3.5 microRNA的功能
        1.3.6 microRNA表達(dá)分析方法
        1.3.7 microRNA生物信息分析及靶基因預(yù)測
    1.4 研究目的意義、內(nèi)容及技術(shù)路線
        1.4.1 研究目的意義
        1.4.2 研究內(nèi)容
        1.4.3 技術(shù)路線
2. 材料與方法
    2.1 主要材料
        2.1.1 細(xì)胞及主要試劑
        2.1.2 引物的設(shè)計(jì)與合成
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 常用試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 建立mCD14 knockdown的RAW264.7穩(wěn)定細(xì)胞系
        2.2.3 布魯氏菌感染mCD14 knockdown的RAW264.7細(xì)胞
        2.2.4 mCD14 knockdown的RAW264.7細(xì)胞miRNA表達(dá)分析
3. 結(jié)果與分析
    3.1 慢病毒感染RAW264.7細(xì)胞mCD14表達(dá)的鑒定
    3.2 基因芯片檢測miRNA表達(dá)差異分析
    3.3 qRT-PCR驗(yàn)證miRNA基因芯片結(jié)果
    3.4 靶基因預(yù)測及功能分類
4. 討論
5. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間科研成果
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3659896