豬等孢球蟲主要寄生于空腸與回腸,可致三周齡以內(nèi)的哺乳仔豬出現(xiàn)腹瀉和體重下降等臨床癥狀,常給養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)利益帶來巨大的損害。在福建省9個地區(qū)的29個豬場,檢測1-8周齡仔豬糞便樣品2173份,檢測結(jié)果為:存在豬等孢球蟲（Isospora suis）的陽性場28個,占檢測豬場數(shù)的96.56%;豬等孢球蟲卵囊總陽性率為9.76%（212/2173）。不同豬場間仔豬等孢球蟲卵囊陽性率最高為27.78%,陽性豬每克糞便卵囊數(shù)（OPG值）在25～115100之間;卵囊陽性率與對數(shù)化的OPG值呈顯著正相關(guān)（R=0.445,P=0.016）。福建省沿海六個地區(qū)的平均氣溫與豬等孢球蟲的卵囊陽性率呈顯著正相關(guān)（R=0.937,P=0.006）。第1周齡至第8周齡仔豬等孢球蟲卵囊陽性率2.66%～17.46%;2周齡仔豬的OPG值顯著高于其它周齡仔豬（P<0.01）;3周齡仔豬的陽性率顯著高于其他周齡（P<0.01）。不使用抗球蟲藥物與使用其它抗球蟲藥的豬場,其仔豬等孢球蟲陽性率、OPG值均顯著高于使用百球清的豬場（P<0.01,P<0.05）。另外發(fā)現(xiàn),高床墊料飼養(yǎng)育成豬的等孢球蟲... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 豬等孢球蟲概述
        1.1 豬等孢球蟲的分類及生物學(xué)特征
            1.1.1 豬等孢球蟲的分類
            1.1.2 豬等孢球蟲的形態(tài)特征
            1.1.3 豬等孢球蟲的生活史
    2 球蟲卵囊的分離方法
        2.1 糞便中分離球蟲卵囊的主要方法
            2.1.1 飽和鹽水漂浮法
            2.1.2 Sheather's蔗糖溶液漂浮法
        2.2 組織中分離球蟲卵囊的主要方法
            2.2.1 飽和硫酸鎂溶液漂浮法
            2.2.2 改良韋氏法(濃硫酸-重鉻酸鈉卵囊洗液處理法)
        2.3 單卵囊分離的主要方法
            2.3.1 玻璃毛細(xì)吸管分離法
            2.3.2 瓊脂分離法
            2.3.3 玻璃紙分離法
    3 豬球蟲的分子生物學(xué)診斷方法
        3.1 酶聯(lián)免疫吸附檢測法(ELISA檢測法)
        3.2 自體熒光顯微鏡檢測技術(shù)
        3.3 PCR技術(shù)
            3.3.1 普通PCR
            3.3.2 巢式PCR(Nested PCR)
            3.3.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)
        3.4 LAMP技術(shù)
            3.4.1 LAMP技術(shù)的原理
            3.4.2 LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測方法
            3.4.3 LAMP技術(shù)與PCR技術(shù)的比較
            3.4.4 LAMP檢測方法在寄生蟲學(xué)上的應(yīng)用及展望
        3.5 本試驗(yàn)的研究目的及意義
第二章 福建省部分豬場豬等孢球蟲感染情況的調(diào)查與分析
    1 材料與方法
        1.1 樣品的采集
        1.2 卵囊檢查及鑒定
        1.3 OPG值測定
        1.4 統(tǒng)計方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 總體檢測情況
        2.2 不同豬場仔豬等孢球蟲的感染情況
        2.3 仔豬等孢球蟲卵囊陽性率與感染強(qiáng)度的關(guān)系
        2.4 豬場規(guī)模對仔豬等孢球蟲感染的影響
        2.5 仔豬等孢球蟲感染的地區(qū)差異
        2.6 仔豬等孢球蟲感染的周齡差異
        2.7 不同飼養(yǎng)地面對豬感染等孢球蟲的影響
        2.8 抗球蟲藥物對仔豬感染等孢球蟲的影響
            2.8.1 不同豬場間的比較
            2.8.2 不同周齡仔豬的比較
    3 小結(jié)與討論
第三章 豬等孢球蟲的PCR診斷方法
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 蟲株與菌株
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器
        1.2 方法
            1.2.1 卵囊的收集與純化
            1.2.2 卵囊DNA提取
            1.2.3 目的基因的PCR擴(kuò)增
            1.2.4 目的基因的克隆
            1.2.5 敏感性試驗(yàn)
            1.2.6 特異性試驗(yàn)
            1.2.7 臨床中特定個數(shù)卵囊的PCR檢測
    2 結(jié)果及分析
        2.1 PCR反應(yīng)溫度的優(yōu)化
        2.2 PCR反應(yīng)模板DNA量的優(yōu)化
        2.3 PCR反應(yīng)引物濃度的優(yōu)化
        2.4 重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定
        2.5 重組質(zhì)粒測序結(jié)果
        2.6 PCR特異性試驗(yàn)
        2.7 PCR敏感性試驗(yàn)
        2.8 臨床中特定個數(shù)卵囊PCR的檢測結(jié)果
    3 小結(jié)與討論
        3.1 豬等孢球蟲卵囊DNA提取方法的優(yōu)化
        3.2 PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化
        3.3 質(zhì)粒及卵囊檢測閥值的確定
第四章 豬等孢球蟲LAMP檢測方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 蟲株與菌株
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器
        1.2 方法
            1.2.1 豬等孢球蟲卵囊的收集與純化
            1.2.2 豬等孢球蟲卵囊DNA的提取
            1.2.3 目的基因的LAMP擴(kuò)增
            1.2.4 特異性試驗(yàn)
            1.2.5 敏感性試驗(yàn)
            1.2.6 臨床中特定個數(shù)卵囊的LAMP檢測
    2 結(jié)果及分析
        2.1 LAMP反應(yīng)Bst DNA聚合酶濃度的優(yōu)化結(jié)果
        2.2 LAMP反應(yīng)Mg~(2+)濃度的優(yōu)化結(jié)果
        2.3 LAMP反應(yīng)dNTPs濃度的優(yōu)化結(jié)果
        2.4 LAMP反應(yīng)甜菜堿濃度的優(yōu)化結(jié)果
        2.5 LAMP反應(yīng)內(nèi)引物的優(yōu)化結(jié)果
        2.6 LAMP特異性試驗(yàn)
        2.7 LAMP敏感性試驗(yàn)
        2.8 臨床中特定個數(shù)卵囊DNA的LAMP檢測
    3 小結(jié)與討論
        3.1 豬等孢球蟲LAMP檢測方法的建立及優(yōu)化
        3.2 LAMP技術(shù)與PCR技術(shù)敏感性的比較
        3.3 LAMP技術(shù)污染的控制
本論文結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
附表1
附圖1
攻讀學(xué)位期間承擔(dān)的科研任務(wù)與主要成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]LAMP和PCR檢測單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的研究[D]. 張亞爽.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
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本文編號：3652127