自2010年4月，在中國的許多地區(qū)暴發(fā)一種以蛋鴨、種鴨產(chǎn)蛋驟然大幅下降為主要臨床特征的疾病，病理特征為卵巢的充血、出血、變形和淋巴細(xì)胞浸潤，肝門管區(qū)間隙炎癥。經(jīng)病原的分離鑒定，該病是由坦布蘇病毒（Tembusu virus，TMUV）引起的一種新的傳染性疾病，加強(qiáng)對本病的研究對預(yù)防和控制坦布蘇病毒感染的發(fā)生具有重要意義。本研究對坦布蘇病毒山東株SD/02進(jìn)行了分離鑒定，成功構(gòu)建了含有坦布蘇病毒prM/E基因和CpG-ODN的DNA疫苗并進(jìn)行了體外瞬時(shí)表達(dá)和體內(nèi)接種試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，所構(gòu)建的DNA疫苗能夠誘導(dǎo)試驗(yàn)鴨產(chǎn)生針對坦布蘇病毒的特異性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，具有良好的免疫保護(hù)效果。通過本研究為坦布蘇病毒的疫苗研制提供了科學(xué)的試驗(yàn)依據(jù)，奠定了良好的基礎(chǔ)。一、坦布蘇病毒山東株SD/02的分離鑒定從疑似感染TMUV病例中分離到一株病毒，采用RT-PCR方法、prM/E序列的測定分析和致病性試驗(yàn)對分離株進(jìn)行了鑒定。分離毒株RT-PCR鑒定結(jié)果顯示，PCR產(chǎn)物與預(yù)期大小一致，其產(chǎn)物序列與坦布蘇病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株相應(yīng)片段核苷酸的同源性達(dá)99%。該毒株的鴨胚半數(shù)致死量（ELD50）為10-2.67/... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
符號說明 中文摘要 Abstract 1 引言
1.1 病原學(xué)
    1.1.1 坦布蘇病毒的分類
    1.1.2 坦布蘇病毒的生物學(xué)特性
    1.1.3 坦布蘇病毒的基因組結(jié)構(gòu)與同源性分析
    1.1.4 坦布蘇病毒的主要蛋白
1.2 流行病學(xué)研究進(jìn)展
1.3 臨床癥狀及病理變化
1.4 檢測方法研究進(jìn)展
1.5 防治
    1.5.1 綜合防治
    1.5.2 免疫預(yù)防
    1.5.3 坦布蘇病毒的新型疫苗
1.6 DNA 疫苗
    1.6.1 DNA 疫苗簡述
    1.6.2 DNA 疫苗的發(fā)展簡史
    1.6.3 DNA 疫苗的免疫機(jī)制
    1.6.4 DNA 疫苗免疫效果的影響因素
    1.6.5 DNA 疫苗的優(yōu)勢及應(yīng)用前景
1.7 研究的目的和意義 2 材料與方法
2.1 材料
    2.1.1 主要材料及試驗(yàn)動(dòng)物
    2.1.2 試驗(yàn)試劑
    2.1.3 質(zhì)粒及受體菌
    2.1.4 主要設(shè)備及儀器
2.2 方法
    2.2.1 主要試劑配制
    2.2.2 坦布蘇病毒山東株 SD/02 的分離鑒定
    2.2.3 坦布蘇病毒 DNA 疫苗的構(gòu)建
    2.2.4 坦布蘇病毒 DNA 疫苗的免疫效果研究 3 結(jié)果與分析
3.1 坦布蘇病毒山東株 SD/02 的分離鑒定
    3.1.1 prM/E 基因的克隆及序列分析
    3.1.2 鴨胚半數(shù)致死量的測定結(jié)果（ELD50）
    3.1.3 1日齡雛鴨腦內(nèi)致病指數(shù)測定結(jié)果（ICPI）
    3.1.4 分離株對 12 日齡肉鴨的致病性研究
3.2 坦布蘇病毒 DNA 疫苗的構(gòu)建
    3.2.1 坦布蘇病毒 prM/E 基因克隆的電泳結(jié)果
    3.2.2 重組質(zhì)粒 pVAX1-prM/E-CpG 的鑒定與測序
    3.2.3 重組質(zhì)粒體外表達(dá)鑒定
3.3 坦布蘇病毒 DNA 疫苗的免疫效果研究
    3.3.1 免疫后不同時(shí)間抗體檢測結(jié)果
    3.3.2 免疫后各組的死亡率和相對保護(hù)率
    3.3.3 各組 CD4+和 CD8+T 淋巴細(xì)胞亞群的百分?jǐn)?shù)及比值變化測定結(jié)果
    3.3.4 血清生化指標(biāo)測定結(jié)果
    3.3.5 細(xì)胞因子 IFN-γ和 IL-6 的含量變化 4 討論 5 結(jié)論 參考文獻(xiàn) 致謝 碩士期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]密碼子優(yōu)化對鴨坦布蘇病毒E基因DNA疫苗免疫應(yīng)答的增強(qiáng)作用[J]. 徐大偉,李國新,李雪松,李云章,李澤君.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2012(05)
[2]鴨坦布蘇病毒E基因DNA疫苗構(gòu)建及免疫原性的初步研究[J]. 徐大偉,李國新,李雪松,姬希文,李云章,李澤君.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(04)
[3]鴨坦布蘇病毒一步法RT-PCR檢測方法的建立和應(yīng)用[J]. 張帥,云濤,葉偉成,鄧曉輝,崔言順,華炯鋼,張存,張燕.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2012(01)
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[5]鴨黃病毒BZ株的生物學(xué)特性研究[J]. 馬秀麗,于可響,高鳳,李玉峰,黃兵,吳靜,秦卓明.  中國家禽. 2011(21)
[6]鴨黃病毒油乳劑滅活疫苗研制及免疫效果測定[J]. 萬春和,施少華,傅光華,梁昭平,王斌,程龍飛,李敏,陳紅梅,林芳,林建生,王鑫,許芬芬,黃瑜.  養(yǎng)禽與禽病防治. 2011(10)
[7]鴨坦布蘇病毒病病原的分離鑒定及生物學(xué)特性研究[J]. 李澤君.  中國家禽. 2011(17)
[8]鴨黃病毒感染研究現(xiàn)狀與展望[J]. 呂玲,俞燕.  中國家禽. 2011(17)
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[10]干擾素-α治療慢性乙型肝炎的療效觀察[J]. 胡旭東,程海林,田德安,曹榮,夏冰,柏濤,甘洪穎,黃少平.  實(shí)用肝臟病雜志. 2011(04)



本文編號：3651772