發(fā)布時間：2022-05-08 13:15

　　以重組的H5N1亞型禽流感病毒（AIV）PB1-F2的C端蛋白（cPB1-F2）為免疫原制備單克隆抗體,并鑒定其特異性。構(gòu)建cPB1-F2的pGEX-6p-1原核表達載體,進行蛋白表達與純化;采用雜交瘤技術(shù)制備篩選抗重組cPB1-F2蛋白的雜交瘤細胞株,利用間接免疫熒光和酶聯(lián)免疫吸附試驗篩選鑒定陽性細胞株,并對單克隆抗體特異性進行鑒定。結(jié)果顯示,純化的重組cPB1-F2蛋白具有良好的免疫原性,篩選獲得了3株穩(wěn)定分泌抗cPB1-F2單克隆抗體的雜交瘤細胞株,分別命名為6F4、2C5和4D3,經(jīng)鑒定抗體均為IgG1亞類,且3株單克隆抗體均能特異性識別重組PB1-F2蛋白。結(jié)果表明成功制備了cPB1-F2特異性單克隆抗體,為研制針對流感病毒的抗體藥物奠定了基礎(chǔ)。 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

SDS-PAGE檢測cPB1-F2融合蛋白的表達與純化

表3 ELISA鑒定cPB1-F2特異性的單克隆抗體Table 3 Specificity detection of cPB1-F2 monoclonal antibodies by ELISA 項目Item cPB1-F2 GST 陰性對照Negative control 6F4 2C5 4D3 6F4 2C5 4D3 OD450 1.430±0.028 1.311±0.055 0.801±0.045 0.091±0.004 0.074±0.001 0.087±0.003 0.071±0.003 P/N 15.813±0.302 17.703±0.497 9.253±0.253 1 1 1圖3 cPB1-F2單克隆抗體與cPB1-F2蛋白結(jié)合產(chǎn)生的特異性熒光

cPB1-F2單克隆抗體與cPB1-F2蛋白結(jié)合產(chǎn)生的特異性熒光

【參考文獻】：
碩士論文
[1]甲型流感PB1-F2分子特征及與人IFITM3基因關(guān)聯(lián)性的研究[D]. 顏文娟.東南大學(xué) 2017
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[3]枯草芽孢桿菌作為細菌活載體遞呈HA蛋白和PB1-F2蛋白及其免疫效果的研究[D]. 黃金鳳.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017



本文編號：3651731