牛呼吸道傳染病多表現(xiàn)為牛呼吸道疾病綜合征，對養(yǎng)牛業(yè)危害嚴重。牛腺病毒3型與牛副流感病毒3型都是已知的牛呼吸道疾病綜合征的重要病原。2009年國內(nèi)首次報道從黑龍江的分離到一株BAV-3，命名為HLJ0955株。而在2008年本實驗室從山東省牛群中首次在國內(nèi)分離到4株BPIV3，為一新的基因型。由于牛群中BAV-3和BPIV3自然感染非常普遍，導(dǎo)致在進行實驗感染時獲取合適的實驗用牛非常困難。因此，SPF實驗動物也許是研究BAV-3和BPIV3致病性的有效動物模型。本研究應(yīng)用病毒分離、熒光定量PCR和免疫組化檢測BAV-3在實驗感染BALB/c小鼠和豚鼠中的組織分布。通過滴鼻接毒（104.5TCID50）小鼠以及豚鼠（105.2TCID50），在接毒后不同時間采集肺臟等組織進行相關(guān)試驗。結(jié)果表明BAV-3能夠在2周齡小鼠肺臟中有效地復(fù)制。IHC結(jié)果表明在接毒后第1到第11天能夠在肺臟內(nèi)皮細胞檢測到BAV-3抗原。熒光定量PCR能夠在接毒小鼠第1到第7天的肺臟中檢測到病毒DNA。BAV-3接毒小鼠會造成出血、肺泡內(nèi)皮細胞增生等病理變化。而在接毒4周齡小鼠體內(nèi)，肺臟病變程度較輕。所有接毒的豚鼠在... 

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中國農(nóng)業(yè)科學院博士學位論文評閱人、答辯委員會簽名表
摘要
Abstract
圖目錄
表目錄
英文縮略表
第一章 引言
    牛呼吸道疾病概述
    1.1 牛腺病毒 3 型概述
        1.1.1 牛腺病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)特征
        1.1.2 BAV-3 基因組結(jié)構(gòu)特征和復(fù)制模型
        1.1.3 腺病毒受體方面的研究概述
        1.1.4 腺病毒作為疫苗載體的研究進展
        1.1.5 BAV-3 的流行病學和致病性研究
        1.1.6 BAV-3 的診斷
    1.2 牛副流感病毒 3 型概述
        1.2.1 BPIV3 的生物學特征
        1.2.2 BPIV3 基因組簡述
        1.2.3 BPIV3 的流行病學和致病性研究
        1.2.4 BPIV3 的臨床癥狀和病理變化
        1.2.5 BPIV3 的診斷
        1.2.6 BPIV3 的預(yù)防
    1.3 本研究的目的和意義
第二章 牛腺病毒 3 型對 BALB/c 小鼠致病性的研究
    摘要
    2.1 材料和方法
        2.1.1 主要試驗儀器和材料
        2.1.2 病毒和細胞
        2.1.3 BALB/c 小鼠的 BAV-3 實驗感染
        2.1.4 病毒分離和滴度測定
        2.1.5 Real-time PCR 檢測
        2.1.6 病理檢測和免疫組化檢測
        2.1.7 病毒中和試驗
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 感染小鼠病毒分離和滴定
        2.2.2 分離組織的 Real-time PCR 檢測
        2.2.3 免疫組化試驗檢測結(jié)果
        2.2.4 病理組織學檢測結(jié)果
        2.2.5 中和試驗檢測結(jié)果
    2.3 討論
第三章 牛腺病毒 3 型對豚鼠致病性的研究
    摘要
    3.1 材料與方法
        3.1.1 主要試驗儀器和材料
        3.1.2 病毒和細胞
        3.1.3 BAV-3對豚鼠的實驗感染
        3.1.4 病毒分離和滴度測定
        3.1.5 Real-time PCR 檢測
        3.1.6 病理檢測和免疫組化檢測
        3.1.7 病毒中和試驗
        3.1.8 肺臟分離的 BAV-3 回歸豚鼠試驗
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 臨床癥狀和解剖學病理變化
        3.2.2 病毒的分離和滴定
        3.2.3 分離組織的 Real-time PCR 檢測
        3.2.4 免疫組化試驗檢測結(jié)果
        3.2.5 病理組織學檢測結(jié)果
        3.2.6 中和試驗檢測結(jié)果
        3.2.7 肺臟分離的 BAV-3 回歸豚鼠試驗
    3.3 討論
第四章 牛副流感病毒 3 型 C 基因型對豚鼠的致病性研究
    摘要
    4.1 材料與方法
        4.1.1 主要試驗儀器和材料
        4.1.2 病毒和細胞
        4.1.3 BPIV3 對豚鼠的實驗感染
        4.1.4 臨床觀察和解剖病理檢查
        4.1.5 病理檢測和免疫組化檢測
        4.1.6 病毒分離和滴度測定
        4.1.7 Real-time RT-PCR 檢測
        4.1.8 病毒中和試驗
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 臨床癥狀和解剖學變化
        4.2.2 豚鼠解剖學病理變化
        4.2.3 豚鼠接毒 SD0835 后病毒的分離滴定
        4.2.4 豚鼠接毒 SD0835 后病毒載量的 Real-time RT-PCR 測定
        4.2.5 組織病理學檢測
        4.2.6 免疫組化檢測結(jié)果
        4.2.7 病毒特異性中和抗體應(yīng)答
    4.3 討論
第五章 牛腺病毒 3 型 Real-time PCR 檢測方法的初步建立
    摘要
    5.1 材料與方法
        5.1.1 病毒和細胞
        5.1.2 主要試劑和儀器
        5.1.3 Real-time PCR 引物和探針的設(shè)計
        5.1.4 標準品質(zhì)粒的制備
        5.1.5 Real-time PCR 反應(yīng)體系的優(yōu)化
        5.1.6 Real-time PCR 標準曲線的建立
        5.1.7 Real-time PCR 敏感性試驗
        5.1.8 Real-time PCR 特異性試驗
        5.1.9 Real-time PCR 重復(fù)性試驗
        5.1.10 臨床樣品的 Real-time PCR
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 標準品的制備
        5.2.2 Real-time PCR 反應(yīng)體系優(yōu)化結(jié)果
        5.2.3 Real-time PCR 標準曲線
        5.2.4 Real-time PCR 敏感性試驗結(jié)果
        5.2.5 Real-time PCR 重復(fù)性試驗結(jié)果
        5.2.6 臨床樣品的檢測結(jié)果
    5.3 討論
第六章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]牛副流感病毒3型的分離鑒定[J]. 劉鵬,侯喜林,周玉龍,樸范澤.  微生物學通報. 2009(09)

博士論文
[1]牛副流感病毒3型山東分離株致病性研究及熒光定量RT-PCR的建立[D]. 董秀梅.中國農(nóng)業(yè)科學院 2012



本文編號：3650256