發(fā)布時(shí)間：2022-05-02 20:03

　　2018年8月我國(guó)發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟（African swine fever,ASF）,并在多地蔓延,由于尚無(wú)疫苗和有效的治療方法,病死率高達(dá)100%,給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大的損失。目前控制該病,主要依靠快速、準(zhǔn)確的診斷方法,盡早發(fā)現(xiàn)、處理,防止擴(kuò)散。為制備特異性的非洲豬瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）p54蛋白單克隆抗體,本研究利用大腸桿菌表達(dá)ASFV p54蛋白C端胞內(nèi)區(qū)片段,構(gòu)建能表達(dá)ASFV p54蛋白的工程菌E.coli BL21/pET-p54,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)可溶性的p54蛋白。用純化后的可溶性蛋白免疫BALB/c小鼠,將免疫小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,經(jīng)4次篩選和3次亞克隆獲得了21株分泌ASFV p54蛋白單克隆抗體的細(xì)胞株。通過ELISA測(cè)定腹水效價(jià),結(jié)果均在1︰40 000～1︰5 120 000范圍之內(nèi)。以免疫組織化學(xué)染色法鑒定單克隆抗體,結(jié)果有9株可以特異性檢出ASFV抗原。對(duì)免疫組化陽(yáng)性的單克隆抗體進(jìn)行亞類鑒定,結(jié)果 5株為IgG1,4株為IgG2a。以免疫印跡試驗(yàn)（Western Blot）和間接免疫熒光法（Indirect ... 

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
材料與方法
    1細(xì)胞、病毒及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2非洲豬瘟陽(yáng)性組織標(biāo)本
    3主要試劑
    4基因合成
    5引物設(shè)計(jì)
    6表達(dá)菌株的構(gòu)建
    7 p54蛋白的表達(dá)、純化與鑒定
    8動(dòng)物免疫
    9檢測(cè)p54抗體的間接ELISA方法
    10細(xì)胞融合及篩選
    11單克隆抗體腹水的制備
    12單克隆抗體效價(jià)測(cè)定
    13單克隆抗體免疫組化鑒定
    14單克隆抗體亞類鑒定
    15單克隆抗體特異性鑒定
        15.1 Western Blot鑒定
        15.2 IFA鑒定
結(jié)果
    1 p54胞內(nèi)區(qū)基因的擴(kuò)增及重組質(zhì)粒的鑒定
    2 p54蛋白的表達(dá)、純化與鑒定
    3免疫動(dòng)物血清ELISA效價(jià)
    4細(xì)胞融合及陽(yáng)性克隆篩選
    5單克隆抗體腹水的制備及效價(jià)測(cè)定
    6單克隆抗體免疫組化鑒定
    7單克隆抗體亞類鑒定
    8單克隆抗體特異性鑒定
        8.1 Western Blot鑒定
        8.2 IFA鑒定
討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]非洲豬瘟病毒免疫學(xué)及疫苗研究進(jìn)展[J]. 張洪亮,金銘,趙越,王鳳雪,馬晶,溫永俊,單虎.  病毒學(xué)報(bào). 2019(03)
[2]非洲豬瘟疫苗研究進(jìn)展[J]. 何洋,康樺華,馮銹華,向華,陳晶,黃忠,袁子國(guó),王曉虎.  傳染病信息. 2019(01)
[3]中國(guó)首例非洲豬瘟診斷研究[J]. 王穎,繆發(fā)明,陳騰,周鑫韜,李楠,呂宗吉,張靜遠(yuǎn),劉曄,張國(guó)軍,張守峰,扈榮良.  病毒學(xué)報(bào). 2018(06)
[4]非洲豬瘟流行現(xiàn)狀分析及診斷方法研究進(jìn)展[J]. 祖立闖,李嬌,謝金文,李峰,沈志強(qiáng).  養(yǎng)豬. 2018(05)
[5]非洲豬瘟研究新進(jìn)展[J]. 鄧俊花,林祥梅,吳紹強(qiáng).  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2017(08)



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