綿羊肺腺瘤�。∣vine Pulmonary Adenocarc-inoma,OPA）是由綿羊肺腺瘤病毒（jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV）引起的一種慢性、漸進式、傳染性羊腫瘤疾病。這種普遍的羊肺腫瘤疾病已在世界上許多國家出現(xiàn),幾乎所有養(yǎng)羊業(yè)發(fā)達的國家,包括我國黑龍江、內(nèi)蒙古、新疆、山東都有該病的報道,嚴(yán)重影響世界范圍內(nèi)養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展^[74]。因此確診該病對于控制和了解其分布具有重要的科學(xué)意義。由于OPA病羊體內(nèi)檢測不到循環(huán)抗體以及無法在體外建立病原的培養(yǎng)體系^[74],常規(guī)的免疫學(xué)方法、病毒分離鑒定無法診斷。目前,實驗室確診該病主要利用PCR和免疫組織化學(xué)方法。本實驗為實現(xiàn)免疫組織化學(xué)方法診斷該病進行了基礎(chǔ)研究。首先根據(jù)Gen Bank上發(fā)表的綿羊肺腺瘤囊膜基因序列（登錄號JQ837489.1）設(shè)計引物,對p EGFP-C1/ex JSRV-env質(zhì)粒（ex JSRV-env與真核表達載體p EGFP-C1的重組質(zhì)粒）進行PCR、酶切、測序比對,確定該重組質(zhì)粒含有完整ex JSRV-env基因;然后以p EGFP... 

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 逆轉(zhuǎn)錄病毒
    1.2 外源綿羊肺腺瘤病毒
        1.2.1 JSRV基因表達產(chǎn)物與功能
        1.2.2 JSRV生活史
    1.3 綿羊肺腺瘤病概況
    1.4 綿羊肺腺瘤的檢測
    1.5 原核表達概述
        1.5.1 大腸桿菌表達系統(tǒng)的優(yōu)缺點
        1.5.2 大腸桿菌表達系統(tǒng)的基本概念
        1.5.3 表達菌的選擇
        1.5.4 pET表達系統(tǒng)原理
    1.6 WesternBlot技術(shù)概述
        1.6.1 WesternBlot試驗的應(yīng)用和原理
        1.6.2 WesternBlot試驗的流程
    1.7 研究目的及意義
2 實驗一綿羊肺腺瘤病毒囊膜基因獲取與原核表達質(zhì)粒構(gòu)建
    2.1 材料
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗試劑
    2.2 方法
        2.2.1 引物設(shè)計合成及目的片段PCR擴增
        2.2.2 pEGFP-C1/exJSRV-env的獲取與鑒定
        2.2.3 目的基因的擴增
        2.2.4 pET-32a載體質(zhì)粒的制備
        2.2.5 原核表達質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.6 重組原核表達質(zhì)粒的鑒定
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 pEGFP-C1/exJSRV-env菌落PCR鑒定結(jié)果
        2.3.2 重組pEGFP-C1/exJSRV-env質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果
        2.3.3 重組質(zhì)粒pET-32a/exJSRV-env菌落PCR鑒定結(jié)果
        2.3.4 重組質(zhì)粒pET-32a/exJSRV-env酶切鑒定結(jié)果
        2.3.5 重組質(zhì)粒pET-32a/exJSRV-env測序結(jié)果
    2.4 討論與小結(jié)
3 實驗二綿羊肺腺瘤病毒重組囊膜蛋白原核表達
    3.1 材料
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗儀器
    3.2 方法
        3.2.1 綿羊肺腺瘤病毒重組囊膜蛋白的表達
        3.2.2 IPTG最佳誘導(dǎo)濃度的確定
        3.2.3 重組蛋白可溶性鑒定
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 IPTG最佳誘導(dǎo)濃度的SDS-PAGE確定
        3.3.2 重組蛋白可溶性鑒定結(jié)果
    3.4 討論與小結(jié)
4 實驗三綿羊肺腺瘤病毒重組囊膜蛋白WesternBlot檢測
    4.1 材料
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗儀器
        4.1.3 實驗試劑
    4.2 方法
    4.3 結(jié)果
    4.4 討論與小結(jié)
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]重組人可溶性Tim-3原核表達載體的構(gòu)建及其重組蛋白的優(yōu)化表達[D]. 白少云.廣西醫(yī)科大學(xué) 2017
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[3]綿羊肺腺瘤病PCR檢測技術(shù)的建立及exJSRV與enJSRV載量相關(guān)性分析[D]. 郭文慶.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
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[7]新疆部分地區(qū)綿羊肺腺瘤病分子流行病學(xué)調(diào)査、病理學(xué)診斷及全基因組分析[D]. 楊素芳.石河子大學(xué) 2015
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[9]玉米抗蟲蛋白基因原核表達載體構(gòu)建及活性研究[D]. 林亨咪.黑龍江大學(xué) 2013
[10]大豆CHS8、CHIⅡ、SAI融合基因的原核表達及植物表達載體構(gòu)建與轉(zhuǎn)化[D]. 錢丹丹.吉林大學(xué) 2011



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