奶水牛和生豬是國家鼓勵和優(yōu)先發(fā)展的兩大產(chǎn)業(yè)。開發(fā)提高水牛繁殖力和豬生長速度的新技術(shù),是促進(jìn)上述兩大產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要舉措。為了：①探討水牛卵泡發(fā)育的調(diào)節(jié)機制,促進(jìn)水牛繁殖新技術(shù)的發(fā)展；②優(yōu)化生長抑素基因免疫程度,分析該疫苗的生物安全性,促進(jìn)該疫苗的推廣應(yīng)用本研究利用。因此本研究從褪黑激素對水牛卵泡顆粒細(xì)胞體外調(diào)節(jié)、生長抑素基因免疫程序優(yōu)化與安全性評定等角度開展研究,主要內(nèi)容和結(jié)果如下：1.褪黑激素對水牛顆粒細(xì)胞的調(diào)節(jié)及其作用機制研究褪黑激素（MLT）受光信號控制,對生殖系統(tǒng)、特別是卵巢功能具有調(diào)節(jié)作用。MLT對水牛卵泡發(fā)育是否有調(diào)節(jié)作用,尚不清楚。本實驗從顆粒細(xì)胞的褪黑激素受體表達(dá)、調(diào)節(jié)及外源MLT對水牛顆粒細(xì)胞凋亡、增殖與激素分泌等方面進(jìn)行了研究,主要內(nèi)容和結(jié)果如下：（1）提取水牛顆粒細(xì)胞RNA,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄獲得細(xì)胞cNDA,并成功擴增出MT1受體特異性條帶,表明水牛顆粒細(xì)胞表達(dá)褪黑激素受體。（2）將水牛顆粒細(xì)胞用含低（0.1nM）、中（1nM）、高（100nM）劑量MLT的培養(yǎng)液處理24小時,在mRNA水平檢測MTl及相關(guān)受體的表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn),MT1受體表達(dá)在各濃度MLT作用下明顯上調(diào)... 

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 我國奶水牛發(fā)展現(xiàn)狀及同期發(fā)情技術(shù)應(yīng)用
    2 褪黑激素對生殖系統(tǒng)的調(diào)控作用
        2.1 褪黑激素對性腺軸的調(diào)控作用
        2.2 褪黑激素對卵巢功能的調(diào)節(jié)作用
        2.3 褪黑激素的其他作用
        2.4 褪黑激素受體研究進(jìn)展
    3 顆粒細(xì)胞對卵泡的作用
        3.1 顆粒細(xì)胞對卵泡發(fā)育的調(diào)節(jié)
        3.2 顆粒細(xì)胞對卵泡閉鎖的調(diào)節(jié)
    4 生長抑素基因疫苗免疫及其研究進(jìn)展
        4.1 我國生豬發(fā)展現(xiàn)狀及生長抑素DNA疫苗的研究進(jìn)展
        4.2 提高SS基因疫苗的免疫效果
            4.2.1 基因疫苗的免疫方式
                4.2.1.1 皮內(nèi)注射法
                4.2.1.2 粘膜免疫法
                4.2.1.3 肌肉注射法
                4.2.1.4 電轉(zhuǎn)化法
                4.2.1.5 其他免疫方式
            4.2.2 基因疫苗的免疫劑量和免疫次數(shù)
        4.3 基因疫苗的安全性和應(yīng)用前景
第二部分 實驗研究
    一、褪黑激素對水牛顆粒細(xì)胞的調(diào)節(jié)
        1 試驗材料
            1.1 試驗細(xì)胞
            1.2 主要實驗試劑及耗材
            1.3 實驗主要試劑盒
            1.4 實驗主要抗體
            1.5 實驗引物設(shè)計列表
            1.6 實驗主要儀器
            1.7 實驗主要試劑的配制
        2 實驗方法
            2.1 水牛顆粒細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
            2.2 褪黑激素受體在水牛顆粒細(xì)胞表達(dá)的檢測
                2.2.1 顆粒細(xì)胞總RNA的提取及cDNA第一鏈合成
                2.2.2 PCR擴增MT受體基因
            2.3 外源添加MLT處理水牛顆粒細(xì)胞
            2.4 水牛顆粒細(xì)胞用MLT處理后相關(guān)基因表達(dá)分析
            2.5 顆粒細(xì)胞用MLT處理后采用流式技術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡
            2.6 顆粒細(xì)胞用MLT處理后采用流式技術(shù)檢測細(xì)胞的周期
            2.7 顆粒細(xì)胞用MLT處理后采用ELISA檢測雌、孕激素濃度
            2.8 顆粒細(xì)胞用MLT處理后凋亡和周期調(diào)控因子的蛋白印跡檢測
                2.8.1 水牛顆粒細(xì)胞總蛋白的提取
                2.8.2 水牛顆粒細(xì)胞總蛋白含量的測定
                2.8.3 SDS-PAGE電泳及蛋白成像
        3 結(jié)果與分析
            3.1 褪黑激素受體在水牛顆粒細(xì)胞表達(dá)的檢測
            3.2 水牛顆粒細(xì)胞用MLT處理后相關(guān)基因表達(dá)、細(xì)胞凋亡周期及激素內(nèi)分泌的影響
                3.2.1 顆粒細(xì)胞在mRNA水平相關(guān)受體基因表達(dá)量的變化
                3.2.2 顆粒細(xì)胞用MLT處理后類固醇激素分泌量的檢測
                3.2.3 顆粒細(xì)胞用MLT處理后對細(xì)胞凋亡和周期的影響及相關(guān)調(diào)控因子在蛋白水平的表達(dá)量
        4 討論
    二、生長抑素基因疫苗免疫程序及安全性研究
        1 試驗材料
            1.1 試驗動物
            1.2 試驗質(zhì)粒菌種
            1.3 主要實驗試劑及耗材
            1.4 主要儀器設(shè)備
            1.5 實驗引物設(shè)計列表
            1.6 主要試劑配制
        2 試驗方法
            2.1 質(zhì)粒的小量提取
            2.2 質(zhì)粒的酶切鑒定
            2.3 質(zhì)粒的大量提取
            2.4 實驗分組及免疫程序
            2.5 稱重記錄、血樣采集和肌肉、脂肪組織的樣品采集
            2.6 抗體檢測
            2.7 激素測定
            2.8 組織DNA的提取
        3 結(jié)果與分析
            3.1 質(zhì)粒的酶切鑒定
            3.2 試驗豬不同階段血漿中CST,GH,SS激素的分泌量
                3.2.1 皮質(zhì)抑素水平
                3.2.2 生長激素水平
                3.2.3 生長抑素水平
            3.3 試驗豬的免疫應(yīng)答反應(yīng)及免疫后抗體水平變化
            3.4 免疫后豬日增重
            3.5 安全性檢測
        4 討論
            4.1 生長抑素DNA疫苗不同免疫方式和免疫劑量的效果評價
            4.2 生長抑素DNA疫苗的安全性檢測
全文結(jié)論
創(chuàng)新與不足
    創(chuàng)新之處
    不足之處
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3647805