試驗(yàn)旨在獲得高活性的豬α干擾素（porcine interferon alpha, PoIFN-α）。利用融合PCR方法將天然豬α干擾素基因進(jìn)行定點(diǎn)突變,突變位點(diǎn)為58H（CAT）→Y（TAC）、59E（GAG）→N（AAC）及61L（CTC）→S（AGC）。將突變基因克隆到pET-32a載體上,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Rosetta中誘導(dǎo)表達(dá)和鑒定,利用MTT法檢測豬α干擾素對(duì)Vero細(xì)胞的抗增殖能力,利用Vero/VSV系統(tǒng)上測定其抗病毒活性。結(jié)果顯示,重組蛋白表達(dá)形式為包涵體,蛋白分子質(zhì)量約33 kDa,純化后豬α干擾素YNS突變體蛋白的CC₅₀為462.7μg/mL,其抗病毒活性為1.63×10~6 IU/mg,相比天然干擾素蛋白活性提高。本研究成功構(gòu)建了高效豬α干擾素YNS突變體,為干擾素的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。 

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒與菌株
    1.2 細(xì)胞與病毒
    1.3 主要試劑
    1.4 引物設(shè)計(jì)及合成
    1.5 豬α干擾素YNS突變體基因的擴(kuò)增
    1.6 重組表達(dá)載體pET-32a-IFN-α的構(gòu)建
    1.7 重組質(zhì)粒pET-32a-IFN-α的表達(dá)及鑒定
    1.8 表達(dá)產(chǎn)物的純化
    1.9 蛋白內(nèi)毒素測定
    1.10 干擾素的生物活性測定
    1.11 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果
    2.1 豬α干擾素突變體的克隆
    2.2 重組蛋白的表達(dá)及鑒定
    2.3 內(nèi)毒素檢測
    2.4 蛋白生物活性測定結(jié)
        2.4.1 干擾素細(xì)胞安全濃度檢測
        2.4.2 抗病毒活性檢測結(jié)果
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雙重?zé)晒釸PA擴(kuò)增方法快速鑒別兩種血清型水泡性口炎病毒[J]. 林彥星,曹琛福,曾少靈,楊俊興,呂建強(qiáng),劉麗娟,花群義.  病毒學(xué)報(bào). 2017(05)
[2]豬α干擾素基因突變、表達(dá)及其高效抗病毒活性篩選研究[J]. 李爽,張杏,崔栩,劉海燕,蘇敬良,金忠輝.  中國獸藥雜志. 2015(04)
[3]豬α-干擾素表達(dá)系統(tǒng)及其應(yīng)用的研究進(jìn)展[J]. 張杏,李爽,崔栩,劉海燕,蘇敬良,金忠輝.  中國獸藥雜志. 2014(10)
[4]豬干擾素α和γ在桿狀病毒中共表達(dá)及對(duì)PRRSV抑制作用[J]. 王彥彬,孫向麗,魏戰(zhàn)勇,陳紅英,楊明凡,崔保安.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(09)
[5]豬α干擾素原核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[J]. 劉占通,崔保安,舒暢,金喜新,陳紅英,楊明凡,魏戰(zhàn)勇.  河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2006(04)
[6]一種新的豬α-干擾素基因克隆及其在大腸桿菌中表達(dá)[J]. 曹瑞兵,張素芳,蔡梅紅,王艷,陳德勝,陳溥言.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2004(03)
[7]重組豬α干擾素基因定點(diǎn)突變及在大腸桿菌中的表達(dá)[J]. 陳濤,于瑞嵩,劉惠莉,李震,曹祥榮.  生物工程學(xué)報(bào). 2002(03)



本文編號(hào)：3647688