為探究三穗麻鴨肌動(dòng)蛋白解聚因子（ADF）基因生物學(xué)功能及其在各組織中的轉(zhuǎn)錄水平,根據(jù)GenBank預(yù)測(cè)的ADF基因序列設(shè)計(jì)特異性引物,以40日齡健康三穗麻鴨腦、心臟及肝臟總RNA提取樣本反轉(zhuǎn)錄為cDNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增、克隆質(zhì)粒構(gòu)建及序列測(cè)定,對(duì)測(cè)定序列進(jìn)行同源性比對(duì)及生物信息學(xué)分析。根據(jù)ADF基因測(cè)定序列設(shè)計(jì)特異性引物,以克隆質(zhì)粒為模板建立三穗麻鴨ADF基因熒光定量PCR檢測(cè)方法并進(jìn)行特異性、重復(fù)性和敏感性試驗(yàn),利用建立的方法檢測(cè)三穗麻鴨組織ADF基因轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明:三穗麻鴨ADF基因完整CDS序列為498 bp,與斑胸草雀ADF基因同源性最高（95.4%）,與非洲爪蟾蜍ADF基因同源性最低（54.1%）;三穗麻鴨ADF基因共編碼165個(gè)氨基酸,理論成熟蛋白質(zhì)分子質(zhì)量約為18.53 ku,等電點(diǎn)為8.14,總平均親水指數(shù)為-0.242;建立的三穗麻鴨ADF熒光定量PCR方法標(biāo)準(zhǔn)曲線呈典型的S型,方程為y=-2.413x+25.061,擴(kuò)增效率為159.6%,相關(guān)系數(shù)為0.991;熔解曲線呈特異性單峰,批內(nèi)、批間重復(fù)變異系數(shù)分別小于2%和3%,最低檢出量為1.939×10^... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版). 2020,41(05)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1) 動(dòng)物和菌株:
        2) 主要試劑:
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        1.2.2 總RNA提取及cDNA樣本制備
        1.2.3 PCR擴(kuò)增目的片段及膠回收
        1.2.4 克隆測(cè)序及標(biāo)準(zhǔn)品制備
        1.2.5 三穗麻鴨ADF基因序列的生物信息學(xué)分析
        1.2.6 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒制備及退火溫度優(yōu)化
        1.2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立和重復(fù)性及敏感性檢測(cè)
        1.2.8 ADF基因在三穗麻鴨各組織中轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)
2 結(jié)果與分析
    2.1 ADF基因擴(kuò)增及克隆
    2.2 ADF基因核苷酸同源性與系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)
    2.3 三穗麻鴨ADF蛋白結(jié)構(gòu)與功能分析
        2.3.1 理化性質(zhì)分析
        2.3.2 親水性分析
        2.3.3 蛋白信號(hào)肽、跨膜區(qū)域預(yù)測(cè)
        2.3.4 O-糖基化位點(diǎn)與蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)
        2.3.5 二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析
    2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法建立
        2.4.1 退火溫度優(yōu)化與標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
        2.4.2 重復(fù)性及敏感性檢測(cè)
        2.4.3 ADF基因在鴨機(jī)體組織中轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]揚(yáng)子鱷IL-1β基因的克隆和生物信息學(xué)分析及表達(dá)量的測(cè)定[J]. 蘇玉鑫,費(fèi)榮梅.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2019(10)

碩士論文
[1]剛地弓形蟲(chóng)ADF基因的生物信息學(xué)分析、克隆表達(dá)及免疫保護(hù)性研究[D]. 李雅清.山西醫(yī)科大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3644747