沙門菌是一種常見的人獸共患致病菌,給養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的損失。流行病學(xué)研究表明,國(guó)內(nèi)規(guī)�；B(yǎng)雞場(chǎng)沙門菌感染的優(yōu)勢(shì)血清型是腸炎沙門菌和雞白痢沙門菌。本實(shí)驗(yàn)室前期建立的檢測(cè)D群沙門菌抗體的O9單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法雖然可以快速、高效地檢測(cè)這兩種沙門菌感染,但無法進(jìn)一步區(qū)分。研究表明,基于H抗原特異性抗體的檢測(cè)方法可以解決這一難題。因此,本研究在已有腸炎沙門菌H:g抗原單抗的基礎(chǔ)上,通過條件的優(yōu)化,建立了快速檢測(cè)腸炎沙門菌抗體的競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法。并且發(fā)現(xiàn),該方法與O9單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA的聯(lián)合使用,可以有效鑒別區(qū)分雞白痢沙門菌的感染,為雞白痢沙門菌凈化提供技術(shù)支撐。1.沙門菌H:g抗原單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的建立以本實(shí)驗(yàn)室制備的12E3雜交瘤細(xì)胞制備腹水單抗,經(jīng)純化標(biāo)記后,其效價(jià)為32000。同時(shí),應(yīng)用酸解法提取腸炎沙門菌鞭毛蛋白作為包被抗原。采用方陣滴定法確定競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法中抗原的最適包被濃度為5.8 μg/mL,酶標(biāo)抗體的最適使用濃度為0.5 μg/mL。在此基礎(chǔ)上,確定待測(cè)血清的最適稀釋度為1:8。經(jīng)過一系列實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化,確定檢測(cè)條件:以PBS作為抗原包被液,4℃包被20h;以含5... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號(hào)說明
文獻(xiàn)綜述 家禽腸炎沙門菌研究進(jìn)展
    1 流行病學(xué)
    2 致病性和感染機(jī)制
    3 SE檢測(cè)方法
        3.1 微生物學(xué)檢測(cè)方法
        3.2 免疫學(xué)檢測(cè)方法
        3.3 分子生物學(xué)檢測(cè)方法
    4 展望
第一章 沙門菌H:g抗原單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的建立
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 生物材料
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器和耗材
        1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 方法
        2.1 雜交瘤細(xì)胞的復(fù)蘇
        2.2 小鼠腹水的制備
        2.3 小鼠腹水的純化與標(biāo)記
        2.4 腸炎沙門菌鞭毛蛋白的提取與純化
        2.5 最適抗原包被濃度與酶標(biāo)抗體濃度的確定
        2.6 最適血清稀釋倍數(shù)的確定
        2.7 最適抗原包被液的確定
        2.8 最適包被條件的確定
        2.9 最適封閉液的確定
        2.10 最適封閉時(shí)間的確定
        2.11 酶標(biāo)抗體最適孵育時(shí)間的確定
        2.12 最適顯色時(shí)間的確定
        2.13 最適抗原包被濃度和酶標(biāo)抗體濃度的優(yōu)化
        2.14 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法閾值的確定
        2.15 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)限的確定
        2.16 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的特異性和敏感性測(cè)定
        2.17 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的重復(fù)性測(cè)定
        2.18 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 單抗純化與標(biāo)記結(jié)果
        3.2 鞭毛蛋白的提取分析結(jié)果
        3.3 最適抗原包被濃度與酶標(biāo)抗體濃度的分析結(jié)果
        3.4 最適血清稀釋度的分析結(jié)果
        3.5 最適包被液分析結(jié)果
        3.6 最適包被條件分析結(jié)果
        3.7 最適封閉液分析結(jié)果
        3.8 最適封閉時(shí)間分析結(jié)果
        3.9 酶標(biāo)抗體最適孵育時(shí)間分析結(jié)果
        3.10 最適顯色時(shí)間分析結(jié)果
        3.11 抗原包被濃度與酶標(biāo)抗體稀釋度的優(yōu)化分析結(jié)果
        3.12 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA閾值分析結(jié)果
        3.13 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)限分析結(jié)果
        3.14 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA的特異性和敏感性測(cè)定結(jié)果
        3.15 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果
    4 討論
第二章 沙門菌H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的組裝與應(yīng)用
    1 材料
        1.1 生物材料
        1.2 被檢樣品
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器和耗材
        1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 方法
        2.1 酶標(biāo)抗體保護(hù)劑的選擇
        2.2 熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
        2.3 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的組裝
        2.4 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的保存穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
        2.5 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的質(zhì)量檢驗(yàn)
        2.6 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的單盲檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
        2.7 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的適用性實(shí)驗(yàn)
        2.8 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒在檢測(cè)養(yǎng)殖場(chǎng)臨床樣品中的應(yīng)用
        2.9 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒與O9單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的聯(lián)用
        2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 保護(hù)劑保護(hù)效果的分析結(jié)果
        3.2 包被有鞭毛蛋白的固相載體的熱穩(wěn)定性分析結(jié)果
        3.3 酶標(biāo)抗體的熱穩(wěn)定性分析結(jié)果
        3.4 陰、陽性對(duì)照和空白對(duì)照血清的熱穩(wěn)定性分析結(jié)果
        3.5 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的組裝結(jié)果
        3.6 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的穩(wěn)定性分析結(jié)果
        3.7 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的質(zhì)量檢驗(yàn)結(jié)果
        3.8 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的單盲檢測(cè)結(jié)果
        3.9 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒與商品化試劑盒的比較結(jié)果
        3.10 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA與PAT的比較結(jié)果
        3.11 不同養(yǎng)殖場(chǎng)臨床樣品的檢測(cè)結(jié)果
        3.12 養(yǎng)殖場(chǎng)不同月份臨床樣品的檢測(cè)結(jié)果
        3.13 H:g單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒與O9單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的聯(lián)用結(jié)果
    4 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]新楊黑與蘇禽綠殼蛋雞雞白痢的檢測(cè)與凈化研究[J]. 蔡丙嚴(yán),田其真,郝福星,張玲,戴建華.  畜禽業(yè). 2019(08)
[2]食品中沙門氏菌檢測(cè)現(xiàn)狀分析[J]. 李惠靜.  現(xiàn)代食品. 2019(09)
[3]雙抗原夾心ELISA法檢測(cè)抗念珠菌烯醇化酶抗體[J]. 汪俊,吳福珍,焦繼光.  海南醫(yī)學(xué). 2018(13)
[4]我國(guó)部分地區(qū)雞、豬源沙門氏菌血清型與耐藥性比較[J]. 李月華,趙建梅,張青青,曲志娜.  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2018(06)
[5]中國(guó)四省份規(guī)�；怆u生產(chǎn)全過程沙門菌的污染狀況和耐藥特征研究[J]. 李薇薇,白莉,張秀麗,遇曉杰,唐震,畢振旺,郭云昌.  中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2018 (04)
[6]種雞場(chǎng)沙門菌血清學(xué)與病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果比較與分析[J]. 劉洋,王傳彬,霍斯琪,劉玉良,張倩,顧小雪.  中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2018(02)
[7]雞白痢沙門氏菌膠體金免疫層析快速檢測(cè)試紙條的研制及初步應(yīng)用[J]. 劉志科,楊寧寧,徐明國(guó),荊明龍,曹旭東,陳創(chuàng)夫.  河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2018(01)
[8]食源性沙門菌PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 劉緒平,李景蓮,熊駿,姜鵬超,蔣雙勤,劉衛(wèi)德.  中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志. 2017(24)
[9]乳粉中金黃色葡萄球菌與沙門氏菌定性檢測(cè)能力驗(yàn)證結(jié)果與分析[J]. 葉玉華.  食品安全導(dǎo)刊. 2017(30)
[10]腸炎沙門菌感染ICR小鼠模型的建立[J]. 王偉,尹海暢,呂興峰,劉思國(guó),陳洪巖,孟慶文.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2017(10)

碩士論文
[1]沙門菌O9抗原單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒的研制及初步應(yīng)用[D]. 耿浩鵬.揚(yáng)州大學(xué) 2018
[2]雞白痢/雞傷寒診斷方法的建立與初步應(yīng)用[D]. 許瑩.揚(yáng)州大學(xué) 2018
[3]我國(guó)部分地區(qū)種雞場(chǎng)沙門菌流行現(xiàn)狀調(diào)查、耐藥性分析及分子分型[D]. 費(fèi)曉.揚(yáng)州大學(xué) 2017
[4]江蘇地區(qū)禽源沙門菌的臨床檢測(cè)及相關(guān)特性的分析[D]. 趙方.揚(yáng)州大學(xué) 2016
[5]水溶性多色量子點(diǎn)的合成及其作為納米熒光探針在蛋品安全檢測(cè)方面的應(yīng)用研究[D]. 王蓓蓓.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[6]一株雞源性腸炎沙門氏菌MLST分型及三型分泌系統(tǒng)基因分析[D]. 王濤.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]小反芻獸疫間接ELISA檢測(cè)方法的優(yōu)化及其應(yīng)用[D]. 陸則基.揚(yáng)州大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3643157