山羊副流感病毒3型（Caprine parainfluenza virus type 3,CPIV3）是副黏病毒科（Paramyxoviridae）呼吸道病毒屬（Respirovirus）中的一員,為有囊膜的單股負(fù)鏈RNA病毒。該病毒能通過氣溶膠進(jìn)行水平傳播,相鄰健康羊只感染后出現(xiàn)與患羊相同的咳嗽、體溫升高、流鼻涕、精神沉郁等臨床癥狀。感染羊只可通過多種途徑向外排毒,嚴(yán)重感染時可在血液中檢出病毒,這為該病的防控增加了難度。研究證實(shí),宿主細(xì)胞微小核糖核酸（Micro-ribonucleic acid,miRNA）是宿主-病原體相互作用的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)中不可或缺的調(diào)節(jié)因子,miRNA通過間接作用于某個細(xì)胞成分影響細(xì)胞內(nèi)通路和調(diào)節(jié)先天性免疫應(yīng)答,在抗病毒感染和復(fù)制方面扮演了重要角色。在前期研究中,將CPIV3接種牛腎細(xì)胞（Madin-darby bovine kidney cells,MDBK）后,通過高通量測序技術(shù)獲得了249個差異表達(dá)的miRNA,其中bta-miR-98與bta-miR-222在感染組中下調(diào)。GO注釋與KEGG富集分析發(fā)現(xiàn),bta-miR-222在抗病毒方面與先天性免疫中有重... 

【文章來源】：貴州大學(xué)貴州省211工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
文獻(xiàn)綜述
    綜述一 副流感病毒3型病原學(xué)及其檢測方法研究進(jìn)展
        1. PIV3病原學(xué)研究進(jìn)展
            1.1 PIV3基因組
            1.2 PIV3結(jié)構(gòu)蛋白
            1.3 PIV3基因組復(fù)制
        2. PIV3檢測方法研究進(jìn)展
            2.1 PIV3病原學(xué)檢測
            2.2 PIV3血清學(xué)檢測
    綜述二 MiRNA研究進(jìn)展
        1. MiRNA的發(fā)現(xiàn)與定義
        2. MiRNA識別及靶基因預(yù)測
        3. 細(xì)胞內(nèi)源miRNA與副黏病毒相互作用
            3.1 細(xì)胞內(nèi)源miRNA影響副黏病毒免疫反應(yīng)
            3.2 細(xì)胞內(nèi)源miRNA影響細(xì)胞分裂與細(xì)胞凋亡
            3.3 細(xì)胞內(nèi)源miRNA影響腫瘤生成
            3.4 細(xì)胞內(nèi)源miRNA對副黏病毒的其他功能
        4. MiRNA與CPIV3
        5. 本研究的目的及意義
試驗(yàn)研究
    第一章 細(xì)胞內(nèi)bta-miR-222 靶向IRF2抑制CPIV3復(fù)制的分子機(jī)制
        1. 材料
            1.1 細(xì)胞與病毒
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2. 方法
            2.1 Bta-miR-222 mimics和bta-miR-222 inhibitor的設(shè)計(jì)與合成
            2.2 Bta-miR-222 對CPIV3復(fù)制的影響
                2.2.1 熒光定量PCR
                2.2.2 病毒多步生長曲線
            2.3 Bta-miR-222 調(diào)控CPIV3復(fù)制的分子機(jī)制
                2.3.1 Bta-miR-222 對IFN產(chǎn)生的影響
                2.3.2 Bta-miR-222 靶基因預(yù)測
                2.3.3 雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)分析bta-miR-222 靶基因
                2.3.4 熒光定量PCR分析bta-miR-222 靶基因
                2.3.5 Western blot分析bta-miR-222 靶基因蛋白表達(dá)水平
                2.3.6 IRF2基因敲除對CPIV3復(fù)制的影響
                2.3.7 統(tǒng)計(jì)分析
        3. 結(jié)果
            3.1 Bta-miR-222 對CPIV3復(fù)制的影響
            3.2 Bta-miR-222 對Ⅰ型干擾素表達(dá)的影響
            3.3 Bta-miR-222 的靶基因預(yù)測
            3.4 雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)分析bta-miR-222 靶基因
                3.4.1 雙熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建與鑒定
                3.4.2 Bta-miR-222 對IRF2的調(diào)控作用
            3.5 敲除IRF2基因?qū)PIV3復(fù)制的影響
        4. 討論
    第二章 細(xì)胞內(nèi)bta-miR-98 靶向Caspase 3 抑制CPIV3復(fù)制的分子機(jī)制
        1. 材料
            1.1 細(xì)胞與病毒
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2. 方法
            2.1 CPIV3誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的檢測
                2.1.0 熒光定量PCR
                2.1.1 Caspase 3/8/9 酶活性檢測
                2.1.2 流式細(xì)胞術(shù)
            2.2 Bta-miR-98 調(diào)控細(xì)胞凋亡影響CPIV3復(fù)制
                2.2.1 Bta-miR-98 mimics和bta-miR-98 inhibitor的設(shè)計(jì)與合成
                2.2.2 Bta-miR-98 對CPIV3復(fù)制的影響
            2.3 Bta-MiR-98 調(diào)控細(xì)胞凋亡影響CPIV3復(fù)制
                2.3.1 Caspase 3 酶活性檢測
                2.3.2 流式細(xì)胞術(shù)
            2.4 Bta-miR-98 調(diào)控CPIV3復(fù)制的分子機(jī)制
                2.4.1 Bta-miR-98 對Caspase 3 產(chǎn)生的影響
                2.4.2 Bta-miR-98 靶基因預(yù)測
                2.4.3 雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)分析bta-miR-98 靶基因
                2.4.4 Caspase 3 基因敲除對CPIV3復(fù)制的影響
            2.5 統(tǒng)計(jì)分析
        3. 結(jié)果
            3.1 CPIV3促進(jìn)MDBK細(xì)胞凋亡
            3.2 Bta-MiR-98 對CPIV3復(fù)制的影響
            3.3 Bta-miR-98 靶基因的預(yù)測
            3.4 雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)分析bta-miR-98 靶基因
                3.4.1 雙熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建與鑒定
                3.4.2 Bta-miR-98 對Caspase 3 的調(diào)控作用
            3.5 Caspase 3 基因敲除對CPIV3復(fù)制的影響
        4. 討論
    第三章 慢病毒介導(dǎo)的bta-miR-222 穩(wěn)定過表達(dá)MDBK細(xì)胞株的構(gòu)建及鑒定
        1. 材料
            1.1 細(xì)胞與病毒
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2. 方法
            2.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
            2.2 Pri-bta-miR-222 與GFP基因片段的擴(kuò)增
            2.3 重組PCDH-miR222GFP質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
            2.4 慢病毒V_(PCDH+miR-222)的包裝
            2.5 V_(PCDH+miR-222)感染MDBK細(xì)胞
            2.6 熒光定量PCR
                2.6.1 細(xì)胞miRNA的分離提取與反轉(zhuǎn)錄
                2.6.2 熒光定量PCR
        3. 結(jié)果
            3.1 重組慢病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
            3.3 重組慢病毒的制備
            3.4 穩(wěn)定表達(dá)bta-miR-222 的MDBK細(xì)胞株的建立
            3.5 熒光定量PCR
        4. 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
碩士研究生期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Paramyxovirus evasion of innate immunity: Diverse strategies for common targets[J]. Michelle D Audsley,Gregory W Moseley.  World Journal of Virology. 2013(02)
[2]麻疹病毒滬191對HeLa腫瘤細(xì)胞抑制作用的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[J]. 嚴(yán)銀芳,楊小清.  微生物學(xué)雜志. 2012(04)
[3]動物副黏病毒感染與對策思考[J]. 顧萬軍,黃良宗.  廣東畜牧獸醫(yī)科技. 2010(06)
[4]副粘病毒F蛋白HR1和HR2在特異性膜融合中的作用[J]. 任桂杰,王志玉,李士保,王桂亭,宋艷艷,許洪芝,溫紅玲.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2005(10)
[5]The Role of TNF Related Apoptosis-Inducing Ligand in Neurodegenerative Diseases[J]. Y.Huang~(1,2) N.Erdmann~(1,2) H.Peng~(1,2) Y.Zhao~(4,5) Jialin Zheng~(1,2,3,6) ~1The laboratory of Neurotoxicology at the Center for Neurovirology & Neurodegenerative Disorders,~2Dept.Pharmacology,~3Dept.of Pathology and Microbiology,~4Dept.of Surgery,University of Nebraska Medical Center,Omaha,NE 68198-5880,USA;~5Institute of Animal Research,Chinese Academy of Science,China;.  Cellular & Molecular Immunology. 2005(02)
[6]膜融合脂質(zhì)體為載體的黑色素瘤疫苗的研究[J]. 李強(qiáng),金一,崔福德.  中國藥學(xué)雜志. 2003(11)
[7]一種新的病毒病—尼帕病毒腦炎[J]. 黃元桐.  山西醫(yī)藥雜志. 2000(02)
[8]干擾素抗體與干擾素治療[J]. 孔麗,劉金星,曹治宸,李兵順.  河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 1998(05)

碩士論文
[1]牛副流感病毒3型C和V蛋白通過負(fù)調(diào)控IRF7拮抗Ⅰ型干擾素表達(dá)的研究[D]. 劉瑩.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]二氯乙酸協(xié)同低劑量溶瘤麻疹病毒治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤[D]. 李春妍.南京大學(xué) 2013
[3]miR-15a對流感病毒誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)制研究[D]. 張菁.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號：3642023