雞傳染性支氣管炎（Infectious bronchitis,IB）是由雞傳染性支氣管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）感染引起的雞的一種急性、高度接觸性傳染病。由于IBV基因組易發(fā)生變異和重組,IBV的基因型和血清型復(fù)雜多樣,且不同血清型間交叉保護性效果不理想。新基因型甚至新血清型不斷出現(xiàn),給IBV的有效防控帶來了巨大困難。本研究從疑似IBV感染的IBV免疫雞群分離鑒定出2株IBV,并對其全基因組進了測序分析以及克隆表達(dá)了S1基因。為進一步了解豐富國內(nèi)IBV流行株的重組變異情況,潛在的免疫逃逸機制以及疫苗毒株篩選依據(jù)等積累了數(shù)據(jù)。1、兩株雞傳染性支氣管炎病毒的分離與鑒定本研究首先從疑似IBV感染的IBV免疫雞群采集發(fā)病雞臟器進行雞胚接種病毒分離。5天后發(fā)現(xiàn)接種兩個腎臟樣品的雞胚出現(xiàn)典型的卷曲侏儒胚。但其尿囊液不具有血凝現(xiàn)象,以尿囊液提取的RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模版。用IBV的S基因特異性引物進行了 PCR擴增鑒定,PCR擴增以及序列測序表明能從兩個尿囊液樣品中擴增出IBV的S基因特異性片段,同時將分離到的這兩個毒株分別命名為IBV34以及IBV... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
文獻綜述
    第一節(jié) 雞傳染性支氣管炎病毒研究進展
        1.1 雞傳染性支氣管炎病毒概況
        1.2 IBV病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)與理化特性
        1.3 IBV的流行病學(xué)
        1.4 IBV的致病性
        1.5 IBV主要蛋白及其功能
            1.5.1 S蛋白
            1.5.2 M蛋白
            1.5.3 N蛋白
            1.5.4 E蛋白
            1.5.5 非結(jié)構(gòu)蛋白
        1.6 IBV的變異與重組
        1.7 IBV分型
        1.8 IBV的免疫防控
            1.8.1 弱毒疫苗
            1.8.2 滅活疫苗
            1.8.3 核酸疫苗
    第二節(jié) 研究目的及意義
研究內(nèi)容一 兩株雞傳染性支氣管炎病毒的分離與鑒定
    1 材料
        1.1 主要試驗材料
        1.2 主要試劑
        1.3 主要試劑的配制
        1.4 主要儀器
    2 方法
        2.1 病毒的繁殖
        2.2 引物的設(shè)計
        2.3 病毒RNA的提取
        2.4 cDNA的制備
        2.5 目的片段的擴增
        2.6 PCR純化產(chǎn)物的連接和轉(zhuǎn)化
        2.7 連接反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化涂板
        2.8 菌落PCR鑒定
    3. 結(jié)果
        3.1 病毒雞胚接種結(jié)果
        3.2 兩株IBV病毒與20株IBV參考毒株S1基因序列比較
    4 討論
研究內(nèi)容二 兩株雞傳染性支氣管炎病毒的全基因組測序與分析
    1 材料
        1.1 主要試驗材料
        1.2 主要材料
        1.3 主要儀器
        1.4主要儀器
    2 方法
        2.1 病毒的增殖
        2.2 引物的設(shè)計
        2.3 病毒RNA的提取
        2.4 cDNA的制備
        2.5 目的片段的擴增
        2.6 PCR純化產(chǎn)物的連接和轉(zhuǎn)化
        2.7 連接反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化涂板
        2.8 全基因組測序分析
    3 結(jié)果
        3.1 IBV34與IBV216兩株病毒各個基因片段擴增結(jié)果
        3.2 IBV34和IBV216毒株全基因組結(jié)構(gòu)
        3.3 分離株IBV 34基因組的同源重組分析
        3.4 分離株IBV216基因組的同源重組分析
    4 討論
研究內(nèi)容三 兩株雞傳染性支氣管炎病毒S1基因的克隆表達(dá)
    1 材料
        1.1 主要試驗材料
        1.2 主要試劑
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
    2. 方法
        2.1 引物設(shè)計與合成
        2.2 RNA的提取
        2.3 cDNA的制備
        2.4 目的片段的擴增
        2.5 RT-PCR產(chǎn)物的膠回收
        2.6 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.7 重組質(zhì)粒的鑒定
        2.8 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及鑒定
    3 結(jié)果
        3.1 兩株IBV病毒S1基因片段的擴增及重組子構(gòu)建
        3.2 重組蛋白GST-S1表達(dá)的SDS-PAGE鑒定
        3.3 重組蛋白GST-S1表達(dá)的Western-blot鑒定
        3.4 間接免疫熒光鑒定S1蛋白真核表達(dá)
    4 討論
全文總結(jié)
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]雞傳染性支氣管炎病毒HH06株囊膜蛋白多克隆抗體制備及生物學(xué)功能檢測[J]. 白妍,趙蕾,杜威威,潘龍,黃小丹,楊貴君,李廣興.  中國畜牧獸醫(yī). 2016(08)
[2]一株雞傳染性支氣管炎病毒的分離和鑒定[J]. 李成元,姚美玲,王廣偉,李勇,高見,劉兵.  中獸醫(yī)學(xué)雜志. 2015(07)
[3]雞傳染性支氣管炎病毒多表位核酸疫苗的構(gòu)建及其免疫研究[J]. 劉芳,譚磊,陸鳳,范瑾,劉開春,王欣,廖瑛,仇旭升,孫英杰,宋翠萍,王桂軍,丁鏟.  中國動物傳染病學(xué)報. 2015(02)
[4]IBV HH06株N基因原核表達(dá)及間接ELISA方法的建立[J]. 李廣興,王新,潘龍,杜威威,黃小丹,孫剛,楊貴君,任曉峰.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2014(05)
[5]禽啄癖分類芻議[J]. 李衛(wèi)東.  中國獸醫(yī)雜志. 2013(07)
[6]雞傳染性支氣管炎病毒廣西分離毒株抗原相關(guān)性的研究[J]. 王秀英,李孟,韋平,陳秋英,韋正吉,磨美蘭,韋天超.  病毒學(xué)報. 2012(06)
[7]傳染性支氣管炎病毒RT-LAMP檢測方法的建立[J]. 范瑾,譚磊,仇旭升,孟春春,包世俊,胡美容,何隨彬,郭小琴,于圣青,陳書明,丁鏟.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2012(11)
[8]我國雞傳染性支氣管炎流行現(xiàn)狀及原因分析[J]. 劉勝旺.  中國家禽. 2010(16)
[9]雞傳染性支氣管炎病毒免疫機制和免疫預(yù)防研究進展[J]. 樊春波,吳建華,艾曉杰.  動物醫(yī)學(xué)進展. 2008(09)
[10]雞傳染性支氣管炎病毒中國地方分離株膜蛋白基因的克隆及序列分析[J]. 任濤,廖明,曹偉勝,辛朝安.  中國獸醫(yī)雜志. 2006(08)

博士論文
[1]2001～2016年間華東地區(qū)IBV分子流行病學(xué)、致病性及S1蛋白的天然免疫應(yīng)答研究[D]. 周海生.揚州大學(xué) 2017
[2]雞傳染性支氣管炎病毒疫苗候選毒株的篩選及評價[D]. 尤永君.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]禽傳染性支氣管炎病毒多表位嵌合DNA疫苗構(gòu)建及免疫研究[D]. 田浪.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3640663